MiRNA378-MiRNA378-通過網(wǎng)腔鈣結(jié)合蛋白介導(dǎo)阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探究阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞中miRNA378/miRNA378*、Calumenin、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和心肌細(xì)胞凋亡的相互關(guān)系和調(diào)控機(jī)制，尋求阿霉素心肌病治療新途徑。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)采用原代培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞，隨機(jī)分為對(duì)照組、阿霉素組、過表達(dá)對(duì)照組、miRN A378過表達(dá)組、miRN A378*過表達(dá)組、沉默對(duì)照組、miRN A378沉默組、miRN A378*沉默組。實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分：
　　1、采用

2、實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）技術(shù)檢測(cè)阿霉素?fù)p傷心肌細(xì)胞miRNA378/miRNA378*表達(dá)量；
　　2、采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá) miRNA378/378*，Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞中miRNA378/378*表達(dá)量以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率，檢測(cè)Calumenin、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白GRP78、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-凋亡信號(hào)通路因子PERK、eIF2a、ATF4mRNA表達(dá)量，采用蛋白印跡(Weste

3、rn-blot)技術(shù)檢測(cè)Calumenin、GRP78、PERK、P-PERK、eIF2a、P-eIF2a、ATF4蛋白表達(dá)量，Tune l檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡；
　　3、再通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)沉默 miRNA378/378*，檢測(cè)上述指標(biāo)表達(dá)量的變化，進(jìn)行反向驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1、與對(duì)照組相比，阿霉素組miRNA378/378*表達(dá)量明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；
　　2、與阿霉素組相比，過表達(dá)miR

4、NA378/378*組Calumenin表達(dá)增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激伴侶蛋白及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-凋亡信號(hào)通路相關(guān)因子表達(dá)量減少，心肌細(xì)胞凋亡顯著減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；而沉默miRNA378/378*組，Calumenin表達(dá)減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增加，細(xì)胞凋亡增多，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　在阿霉素?fù)p傷的心肌細(xì)胞中，miRNA378和miRNA378*可能通過上調(diào)Calumenin表達(dá)，緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其介導(dǎo)