L-精氨酸對(duì)丙烯腈損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、第一部分:丙烯腈對(duì)心肌細(xì)胞的毒性作用
　　[目的]研究不同濃度ACN對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9c2生長(zhǎng)、增殖、壞死及凋亡的影響。
　　[方法](1)大鼠心肌細(xì)胞H9c2的培養(yǎng)及傳代。(2) ACN染毒濃度的篩選:選用5個(gè)不同濃度梯度，分別為0，1，10，100，1000μg/mL ACN與細(xì)胞共孵育24小時(shí)，并檢測(cè)心肌細(xì)胞活力。(3) ACN染毒:根據(jù)篩選結(jié)果，選用5個(gè)不同濃度梯度，分別為0，30，100，300，1000μg/mL

2、，混入細(xì)胞培養(yǎng)液后與細(xì)胞共孵育24小時(shí)。(4)分別觀察各孔H9c2心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞活力檢測(cè)、乳酸脫氫酶活性檢測(cè)、細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)及細(xì)胞內(nèi)microRNA208a和microRNA21的表達(dá)。
　　[結(jié)果](1)1μg/mL的ACN對(duì)細(xì)胞活性影響較小，而10，100，1000μg/mL三個(gè)濃度的ACN對(duì)細(xì)胞活性影響較大，P＜0.05，且IC50=270μg/mL。(2) ACN可使梭形細(xì)胞數(shù)量明顯減少，不規(guī)則圓形細(xì)胞數(shù)量增多，

3、排列松散，甚至出現(xiàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞產(chǎn)生細(xì)胞碎片。(3)100，300，1000μg/mL ACN對(duì)心肌細(xì)胞活力有影響，P＜0.05，而且ACN濃度與心肌細(xì)胞活力間存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。(4)100，300，1000μg/mL濃度ACN對(duì)心肌細(xì)胞的破壞導(dǎo)致LDH的釋放增加，P＜0.05，而且ACN濃度與細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH活性存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。(5)各ACN濃度組細(xì)胞以壞死為主，凋亡比例最高不超過(guò)4％，ACN染毒濃度與壞死比例之間存在劑量-

4、效應(yīng)關(guān)系。(6)與對(duì)照組相比(0μg/mL ACN)，各濃度ACN染毒均可引起心肌細(xì)胞microRNA208a及microRNA21表達(dá)的下調(diào)。
　　[結(jié)論]ACN對(duì)大鼠心肌細(xì)胞H9c2有明顯毒性作用，在細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞活力、細(xì)胞破壞導(dǎo)致釋放的LDH活性、細(xì)胞壞死等方面均有顯著影響，而且呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)關(guān)系，microRNA208a及microRNA21可能參與了ACN對(duì)心肌細(xì)胞毒性作用的調(diào)控。
　　第二部分:L-精氨酸對(duì)丙烯腈

5、損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用
　　[目的]研究L-Arg預(yù)處理對(duì)不同濃度ACN造成大鼠心肌細(xì)胞H9c2損傷的保護(hù)作用。
　　[方法](1)大鼠心肌細(xì)胞H9c2的培養(yǎng)及傳代。(2) L-Arg干預(yù)濃度的篩選:選用5個(gè)不同濃度梯度，分別為0，0.2，1，5，25mM濃度的L-Arg，預(yù)處理心肌細(xì)胞2小時(shí)，再以250μg/mL濃度ACN與細(xì)胞共孵育24小時(shí)，檢測(cè)細(xì)胞活力。(3)L-Arg預(yù)處理+ACN染毒:根據(jù)篩選結(jié)果，選用25mM濃度

6、L-Arg預(yù)處理細(xì)胞2小時(shí)，余同第一部分(3)。(4)同第一部分(4)。
　　[結(jié)果](1)與不加L-Arg相比，0.2，1，5mM濃度的L-Arg預(yù)處理對(duì)心肌細(xì)胞活性的保護(hù)作用較小，而25 mM濃度的L-Arg預(yù)處理對(duì)心肌細(xì)胞活性有顯著保護(hù)作用，P＜0.05。(2) L-Arg可使心肌細(xì)胞形態(tài)受損減輕。(3) L-Arg預(yù)處理可使心肌細(xì)胞活力增加，在100、300μg/mL兩個(gè)濃度的保護(hù)作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但25 mM濃度的L-A

7、rg預(yù)處理后不染毒ACN，心肌細(xì)胞活力較空白對(duì)照組也略有下降。(4)L-Arg干預(yù)后可降低細(xì)胞培養(yǎng)上清液LDH活性，而且在100、300μg/mL兩個(gè)濃度有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(5) L-Arg預(yù)處理后各ACN濃度組細(xì)胞仍以壞死為主，但L-Arg預(yù)處理在30、300、1000μg/mL ACN染毒濃度組有減少心肌細(xì)胞壞死的作用，而對(duì)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用不明顯。(6)與單純ACN染毒組相比，L-Arg預(yù)處理可使30、100ug/mL濃度ACN組心肌

8、細(xì)胞microRNA208a及microRNA21表達(dá)的顯著上調(diào)，而在300、1000ug/mL濃度ACN組未見(jiàn)microRNA208a及microRNA21表達(dá)上調(diào)。
　　[結(jié)論]L-Arg預(yù)處理對(duì)ACN致心肌細(xì)胞的毒性影響有一定保護(hù)作用，特別是在100-300μg/mL的ACN染毒濃度范圍內(nèi)比較明顯，但25mM濃度的L-Arg本身對(duì)細(xì)胞亦有一定的損傷作用，microRNA208a及microRNA21調(diào)控可能參與L-Arg對(duì)A