PI3K-Akt在Wnt5a誘導(dǎo)的人骨肉瘤細(xì)胞遷移中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究Wnt5a是否能誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞的遷移，并探討PI3K/Akt信號(hào)通路是否參與到這個(gè)過(guò)程。
　　方法：人骨肉瘤MG-63細(xì)胞首先被培養(yǎng)在包含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基中。在行劃痕實(shí)驗(yàn)時(shí)先將細(xì)胞接種在96孔板中，待細(xì)胞張滿后，血清饑餓24小時(shí)，采用塑料無(wú)菌槍頭行劃痕。然后在人重組Wnt5a刺激下觀察10小時(shí)后的變化，并用相機(jī)采集圖像，觀察其細(xì)胞遷移行為學(xué)結(jié)果。再用siRNA阻斷Akt，觀察其細(xì)胞遷移情況的變化。在上述過(guò)程中

2、蛋白水平的變化采用western blot的方法進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)Wnt5a刺激能夠促進(jìn)人骨肉瘤MG-63細(xì)胞的遷移，而Wnt5a使用的劑量為100 ng/ml。在這個(gè)過(guò)程中PI3K/Akt信號(hào)通道蛋白的磷酸化介導(dǎo)了這個(gè)過(guò)程。我們采用LY294002來(lái)阻斷PI3K時(shí)，發(fā)現(xiàn)Wnt5a誘導(dǎo)MG-63細(xì)胞的遷移能力降低，同時(shí)Akt(p-Ser473)的磷酸化減少。另外，siRNA阻斷Akt，MG-63細(xì)胞的遷移能力亦降低。<