替格瑞洛含藥血清對人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1的損傷作用及機制研究.pdf

1、目的:探究藥物替格瑞洛對人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1的損傷作用及機制。
　　方法:體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1，抽取一例服用替格瑞洛(180mg/d)后2h的急性冠脈綜合征(ACS)病人血液標(biāo)本，將其離心后取上層血清，與高糖培養(yǎng)液DMEM混合后配置成濃度分別為5％、10％、15％、20％的替格瑞洛含藥血清，同時取該病人服用替格瑞洛前的正常血清作為對照，與人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1共同培養(yǎng)24h、48h及72h，采用倒置相差

2、顯微鏡觀察正常對照組GES-1的形態(tài)以及各個濃度藥物與GES-1細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變情況、噻唑藍(lán)試劑盒(MTT)測定GES-1細(xì)胞活力及增殖情況、流式細(xì)胞儀檢測各濃度組含藥血清與GES-1共培養(yǎng)24h后細(xì)胞凋亡情況，細(xì)胞免疫熒光法檢測各組細(xì)胞中Occludin、ZO-1蛋白表達(dá)，透射電鏡觀察對照組和15％含藥血清實驗組細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)的變化，蛋白免疫印跡法檢測對照組和各濃度藥物組細(xì)胞中目標(biāo)蛋白Occludin及ZO-1的

3、表達(dá)。
　　結(jié)果:倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)對照組GES-1細(xì)胞數(shù)量較多，鋪滿整個視野，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，外觀呈扁平長梭狀，而實驗組GES-1細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞外形變圓或者不規(guī)則、可見較多凋亡細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)瓶內(nèi);MTT比色法顯示替格瑞洛含藥血清對GES-1細(xì)胞的損傷隨著濃度增加而加重，各濃度組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而同一組細(xì)胞不同培養(yǎng)時間下的細(xì)胞增殖抑制率無統(tǒng)計學(xué)差異;流式細(xì)胞術(shù)檢測表明，實驗組細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度增加而逐漸增大，各濃度

4、組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義;細(xì)胞免疫熒光法顯示實驗組細(xì)胞Occludin、ZO-1表達(dá)降低，陽性染色區(qū)面積減小，平均光密度值降低;透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)對照組GES-1細(xì)胞胞膜完整、細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)緊密無缺損，可見橋粒，而實驗組細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)有缺損破壞，橋粒消失，細(xì)胞間隙增大;蛋白免疫印跡實驗發(fā)現(xiàn)實驗組緊密連接蛋白Occludin、ZO-1表達(dá)量下降。
　　結(jié)論:替格瑞洛作用于人胃黏膜上皮細(xì)胞后可抑制其增殖并促進(jìn)其凋亡，可使緊密連接蛋白Oc