替格瑞洛含藥血清對(duì)人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1的損傷作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:探究藥物替格瑞洛對(duì)人胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1的損傷作用及機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1，抽取一例服用替格瑞洛(180mg/d)后2h的急性冠脈綜合征(ACS)病人血液標(biāo)本，將其離心后取上層血清，與高糖培養(yǎng)液DMEM混合后配置成濃度分別為5％、10％、15％、20％的替格瑞洛含藥血清，同時(shí)取該病人服用替格瑞洛前的正常血清作為對(duì)照，與人胃黏膜上皮細(xì)胞株GES-1共同培養(yǎng)24h、48h及72h，采用倒置相差

2、顯微鏡觀察正常對(duì)照組GES-1的形態(tài)以及各個(gè)濃度藥物與GES-1細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變情況、噻唑藍(lán)試劑盒(MTT)測(cè)定GES-1細(xì)胞活力及增殖情況、流式細(xì)胞儀檢測(cè)各濃度組含藥血清與GES-1共培養(yǎng)24h后細(xì)胞凋亡情況，細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)各組細(xì)胞中Occludin、ZO-1蛋白表達(dá)，透射電鏡觀察對(duì)照組和15％含藥血清實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞緊密連接結(jié)構(gòu)的變化，蛋白免疫印跡法檢測(cè)對(duì)照組和各濃度藥物組細(xì)胞中目標(biāo)蛋白Occludin及ZO-1的

3、表達(dá)。
　　結(jié)果:倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組GES-1細(xì)胞數(shù)量較多，鋪滿整個(gè)視野，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，外觀呈扁平長(zhǎng)梭狀，而實(shí)驗(yàn)組GES-1細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞外形變圓或者不規(guī)則、可見較多凋亡細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi);MTT比色法顯示替格瑞洛含藥血清對(duì)GES-1細(xì)胞的損傷隨著濃度增加而加重，各濃度組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而同一組細(xì)胞不同培養(yǎng)時(shí)間下的細(xì)胞增殖抑制率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)表明，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度增加而逐漸增大，各濃度

4、組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;細(xì)胞免疫熒光法顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Occludin、ZO-1表達(dá)降低，陽性染色區(qū)面積減小，平均光密度值降低;透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組GES-1細(xì)胞胞膜完整、細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)緊密無缺損，可見橋粒，而實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞間緊密連接結(jié)構(gòu)有缺損破壞，橋粒消失，細(xì)胞間隙增大;蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組緊密連接蛋白Occludin、ZO-1表達(dá)量下降。
　　結(jié)論:替格瑞洛作用于人胃黏膜上皮細(xì)胞后可抑制其增殖并促進(jìn)其凋亡，可使緊密連接蛋白Oc