五肽胃泌素后處理對(duì)人胃黏膜上皮細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究五肽胃泌素后處理對(duì)人胃黏膜E皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用并初步探討其機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細(xì)胞系(GES-1)，建立缺氧/復(fù)氧損傷模型。實(shí)驗(yàn)時(shí)細(xì)胞隨機(jī)分為五組：常氧對(duì)照組(N)、缺氧/復(fù)氧組（H/R）、五肽胃泌素(Pentagastrin)后處理組(PP)、胃泌素受體拮抗劑(Proglumide)+五肽胃泌素后處理組(P+PP)、DMSO溶劑對(duì)照組(DM)。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)

2、胞凋亡百分率，Hoechst33258熒光染色觀察凋亡細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)變化，可見(jiàn)光分光光度法測(cè)定胞漿總超氧化物歧化酶(T-SOD)和丙二醛(MDA)水平，免疫印跡法測(cè)定胞漿Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果：MTT檢測(cè)顯示，各組細(xì)胞存活率分別為100.0％±0％、54.8％±1.6％、73.8％±1.4％、62.0％±2.4％和54.2±％1.0％。五肽胃泌素后處理可以對(duì)胃粘膜細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷具有保護(hù)作用，PP與H/R比較，

3、細(xì)胞存活率明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。胃泌素受體拮抗劑能夠翻轉(zhuǎn)五肽胃泌素后處理的保護(hù)效應(yīng)，P+PP與PP比較，細(xì)胞存活率降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。流式細(xì)胞儀分析顯示，各組細(xì)胞凋亡率分別為2.62％±0.46％、14.74％±2.13％、5.28％±1.19％、10.18％±1.40％和13.51％±2.17％。PP與H/R比較，細(xì)胞凋亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。P+PP與PP比較，

4、細(xì)胞凋亡率升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。Hoechst33258熒光染色顯示，H/R凋亡陽(yáng)性細(xì)胞增多，PP凋亡細(xì)胞減少，P+PP凋亡細(xì)胞增多。可見(jiàn)光分光光度法檢測(cè)顯示，各組細(xì)胞T-SOD活性分別為31.56％±2.87％，23.36％±1.43％,29.80％±1.59％,24.54％±1.09％和23.16％±1.65％U/mL。MDA水平分別為1.30％±0.54％,3.38％±1.05％,1.41％±0.52％，2.6

5、4％±0.37％和3.60％±0.82％nmol/mL。Westernblot檢測(cè)顯示，正常人胃黏膜上皮細(xì)胞表達(dá)Bcl-2和Bax;H/R與N比較，Bcl-2表達(dá)減少，Bax表達(dá)增加;PP與H/R比較，Bcl-2表達(dá)增加，Bax表達(dá)減少；P+PP與PP比較，Bcl-2表達(dá)減少，Bax表達(dá)增加。
　　 結(jié)論：1．缺氧2h/復(fù)氧4h模型能夠促使GES-1發(fā)生凋亡；2.100μmol/L的Pentagastrin后處理能夠明顯減少缺氧