缺氧后處理影響肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞線粒體途徑凋亡機制的研究.pdf

1、目的:探討缺氧后處理影響肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞線粒體途徑凋亡的機制,為研究急性肺損傷保護措施提供新的實驗依據(jù)。
　　 方法:將傳3代培養(yǎng)的人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞系(A549細(xì)胞)隨機分成3組,每組6個標(biāo)本,分別為常氧(Normoxia)組、缺氧復(fù)氧(H/R)組和缺氧后處理(H-PostC)組。①Normoxia組(37℃,5％CO2,95％air)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h;②H/R組缺氧(37℃,5％CO2,95％N2)12h后再復(fù)氧(37℃

2、,5％CO2,95％air)12h;③H-PostC組缺氧(37℃,5％CO2,95％N2)12h后給予重復(fù)三次的5min復(fù)氧/5min缺氧的后處理,繼以恢復(fù)氧供(5％CO2,95％air)12h。實驗前后在倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;利用流式細(xì)胞儀檢測各組A549細(xì)胞的凋亡率;RT-PCR檢測Bax、Bcl-2基因的表達量。
　　 結(jié)果:①細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:Normoxia組:可見胞體呈梭形,細(xì)胞明亮,緊貼瓶底,無懸

3、浮細(xì)胞:H/R組:胞體變圓,細(xì)胞間隙增寬,培養(yǎng)上清液中可見漂浮的細(xì)胞和細(xì)胞碎片;H-PostC:少部分細(xì)胞胞體變圓,細(xì)胞間隙稍增寬。②細(xì)胞凋亡率(％):三組間檢測指標(biāo)比較,差異均顯著(P＜0.05)。與Normoxia組(0.3000±0.1276)比較,I/R組(7.2517±1.2648)明顯升高(p＜0.05);而H-PostC組(4.1783±1.0364)則明顯低于I/R組(p＜0.05)。③Bax基因的表達:三組間比較,差異

4、均有顯著性(P＜0.05);與Normoxia組(12.4733±1.0657)比較,H/R組(22.6800±0.3628)明顯升高(p＜0.05);而H-PostC組(16.9583±0.6151)則明顯低于H/R組(p＜0.05)。④Bcl-2基因的表達:三組間比較,差異均顯著(P＜0.05)。與Normoxia組(27.4583±0.8504)比較,H/R組(17.9683±0.5299)明顯降低(p＜0.05);而H-Post