大鼠重癥急性胰腺炎時細(xì)胞內(nèi)Ca2+對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 揭示重癥胰腺炎相關(guān)肺損傷的主要發(fā)病機(jī)制，探討中藥清胰湯、地塞米松、維拉帕米對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的凋亡、胞內(nèi)游離鈣離子濃度、Bax及Caspase-8相關(guān)凋亡基因調(diào)控系統(tǒng)及促炎細(xì)胞因子表達(dá)水平的影響。為揭示胞內(nèi)游離鈣離子超載與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性、細(xì)胞凋亡介導(dǎo)的肺損傷機(jī)制及藥物的保護(hù)機(jī)制提供了實(shí)驗依據(jù)和理論指導(dǎo)。
　　 方法:
　　 (1)健康雄性SD大鼠60只隨機(jī)分為5組，每組12只:模型組（SAP組），

2、對照組(CON組)，清胰湯治療組（QYT組），地塞米松治療組（DEX組），維拉帕米治療組(VER組)。采用經(jīng)十二指腸乳頭胰膽管逆行注射1.5％脫氧膽酸鈉（1ml/kg體重/只/次），建立SAP模型。CON組開腹后僅輕微翻動胰腺數(shù)次。藥物治療組大鼠在規(guī)定時間點(diǎn)分別給予藥物處理。地塞米松組（劑量:0.2ml/100g體重/只/次，緩慢靜推，速度0.3ml/min）及維拉帕米組（0.05ml/100g體重/只/次，用生理鹽水稀釋至地塞米松組等

3、容緩慢靜推，速度0.3ml/min）于造模后立即靜脈注射藥物一次及造模后6h，12h分別再次給藥。清胰湯組（劑量:1.0ml/100g體重/只/次）造模前0.5h經(jīng)胃管灌入中藥清胰湯一次及造模后6h，12h分別再灌胃一次。(2)在造模后24h，分離培養(yǎng)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率、用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測胞內(nèi)游離的鈣離子濃度及反轉(zhuǎn)錄法檢測凋亡基因Bax及Caspase-8的轉(zhuǎn)錄水平;并且行肺組織和胰腺組織病理學(xué)檢查;用

4、免疫組化法檢測Bax和Caspase-8的蛋白表達(dá);用放免法測定血清細(xì)胞因子;全自動生化分析儀進(jìn)行血?dú)夥治?采用真空干燥法檢測肺濕/干比重。
　　 結(jié)果:
　　 與對照組相比，肺組織病理切片HE染色結(jié)果顯示SAP組符合ALI的改變;SAP組動脈PaO2明顯降低(P＜0.01);SAP組肺濕/干比值明顯增高(P＜0.01):SAP組TNF-α和血清AMY含量明顯增高(P＜0.01);流式細(xì)胞儀檢測SAP組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋

5、亡明顯增高(P＜0.01);激光掃描共聚焦顯微鏡檢測顯示SAP組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子濃度明顯增高(P＜0.01);RTPCR結(jié)果顯示SAP組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的Bax及Caspase-8凋亡基因表達(dá)明顯增高(P＜0.01);免疫組化檢測顯示Bax及Caspase-8凋亡基因蛋白表達(dá)明顯增高(P＜0.01)。經(jīng)藥物治療后各項指針都較模型組不同程度的降低。
　　 結(jié)論:
　　 (1)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的凋亡參與重癥急性

6、胰腺炎相關(guān)急性肺損傷(ALI)的過程。
　　 (2)ALI時血清中TNF-α的含量明顯增加。
　　 (3)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)破壞參與細(xì)胞的凋亡。
　　 (4)ALI時，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的凋亡基因Bax、Caspase-8mRNA的表達(dá)增加，線粒體途徑和死亡受體途徑可能同時參與肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的凋亡并發(fā)揮調(diào)控作用。
　　 (5)應(yīng)用清胰湯、地塞米松、維拉帕米可以明顯減輕肺組織損傷程度，降低血清中T