葛根素預處理對缺氧-復氧損傷后人臍靜脈內皮細胞的保護作用.pdf

1、目的：觀察葛根素（PUE）預處理對缺氧（H）/復氧（R）損傷后人臍靜脈內皮細胞的內皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表達量、eNOS Ser633位點磷酸化水平、誘導型NOS（iNOS）表達量，以及NOS酶活性的改變，以明確PUE預處理對內皮細胞的保護作用。
　　方法:以人臍靜脈內皮細胞株(HUVECs)為研究對象，用缺氧條件培養(yǎng)2、4或8小時然后恢復常氧條件培養(yǎng)4小時的方法造成細胞缺氧/復氧（H/R）損傷。將HUVECs隨機分為8

2、組：正常對照（Control）組、缺氧2小時/復氧4小時（H2/R4）組、缺氧4小時/復氧4小時（H4/R4）組、缺氧8小時/復氧4小時（H8/R4）組、葛根素預處理（PUE）組、 PUE+H2/R4組、PUE+H4/R4組及PUE+H8/R4組。葛根素預處理組均用含葛根素終濃度為1.0×10-3mol/L的培養(yǎng)基預先處理24小時。采用western blotting方法分別檢測各組細胞的eNOS總蛋白表達量、eNOS Ser633位點

3、磷酸化水平及iNOS蛋白表達量。采用化學比色法檢測各組細胞中NOS活性。
　　結果:與Control組相比較，H/R培養(yǎng)后HUVECs的eNOS總蛋白表達及eNOS Ser633磷酸化水平明顯下調，iNOS蛋白表達量明顯增加；在H/R各組間，隨著缺氧培養(yǎng)時間的延長，eNOS總蛋白表達量及其Ser633位點磷酸化水平逐漸下降，iNOS蛋白表達無明顯變化；與同時間點H/R組比較，應用PUE預處理后eNOS總蛋白表達及eNOS Ser6

4、33磷酸化水平明顯上調，iNOS蛋白表達減少；單純應用PUE組與Control組相比，eNOS總蛋白表達、eNOS Ser633位點磷酸化水平及iNOS蛋白表達無明顯變化。與Control組相比，H/R培養(yǎng)后HUVECs的總NOS（total NOS，tNOS）和iNOS活力增加，而結構型NOS（cNOS）活力下降；在H/R各組間，隨著缺氧培養(yǎng)時間的延長，tNOS和iNOS活力無明顯變化，cNOS活力逐漸下降；與同時間點H/R組比較，P

5、UE預處理后iNOS活力下降，cNOS活力明顯增加，tNOS活力無明顯變化；單純PUE預處理組與Control組相比，tNOS、iNOS及cNOS活力無明顯變化。
　　結論：缺氧/復氧培養(yǎng)后可以使HUVECs eNOS總蛋白表達及eNOS Ser633位點磷酸化水平降低、cNOS酶活力降低，同時iNOS蛋白表達增加、iNOS酶活力增強，內皮細胞功能受損。應用PUE預處理可以上調缺氧/復氧損傷后HUVECs eNOS總蛋白表達及eN