不同銅含量的鈦銅合金對(duì)成骨細(xì)胞粘附與遷移影響的研究.pdf

1、目的:研究不同銅含量的鈦銅合金對(duì)成骨細(xì)胞的粘附增殖與遷移的影響，找到有利于成骨細(xì)胞粘附增殖與遷移的最優(yōu)含銅質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
　　研究方法:制備含銅質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2wt％、5wt％和10wt％的鈦銅合金，分別命名為Ti-2wt％Cu、Ti-5wt％Cu和Ti-10wt％Cu三組，以不含銅的純鈦材料作為對(duì)照，命名為Ti組。選用小鼠MC3T3-E1成骨細(xì)胞系，以生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的細(xì)胞為研究對(duì)象，將細(xì)胞培養(yǎng)于材料表面。(1)成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察:掃描

2、電鏡觀察成骨細(xì)胞的表面形貌及粘附鋪展情況;熒光顯微鏡觀察鬼筆環(huán)肽染色細(xì)胞骨架-肌動(dòng)蛋白及粘附鋪展情況。(2) MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞的增值。(3)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)法分析細(xì)胞的遷移情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)細(xì)胞增殖與遷移的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，測(cè)定結(jié)果用平均數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行描述，組間進(jìn)行單因素方差分析。
　　結(jié)果:1.成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察
　　(1)表面形貌觀察:細(xì)胞接種6h后均已初步伸展，Ti-5wt％Cu、Ti-10w

3、t％Cu兩組表面成骨細(xì)胞出現(xiàn)絲足結(jié)構(gòu)，Ti、Ti-2wt％Cu兩組細(xì)胞剛剛見伸展形態(tài)，尚無明顯此結(jié)構(gòu)。細(xì)胞接種24h后，四組材料上的細(xì)胞均出現(xiàn)絲足和片足結(jié)構(gòu)，表現(xiàn)出正常的細(xì)胞形態(tài)，Ti-5wt％Cu、Ti-10wt％Cu兩組細(xì)胞多呈現(xiàn)多角形，偽足數(shù)量較多，但Ti-5wt％Cu偽足數(shù)量相對(duì)更多，Ti、Ti-2wt％Cu兩組多呈現(xiàn)長(zhǎng)梭形，偽足數(shù)量較少。細(xì)胞接種48h時(shí)，各組材料上的細(xì)胞均已完全鋪展，扁平狀，胞漿豐富，但Ti-5wt％Cu鋪展

4、面積最大。
　　(2)細(xì)胞骨架觀察:細(xì)胞接種1h后，四組材料僅在樣片邊緣找到零星的數(shù)個(gè)細(xì)胞，均呈圓形，呈剛剛貼壁為伸展?fàn)顟B(tài)。細(xì)胞接種2h后，Ti、Ti-2wt％Cu、Ti-5wt％Cu三組材料表面的細(xì)胞大多數(shù)均呈現(xiàn)圓形，初步伸出偽足，不能觀察到細(xì)胞骨架形態(tài)，Ti-10wt％Cu組部分細(xì)胞已呈現(xiàn)出多形性，鋪展面積較其他三組大，可清晰觀察到細(xì)胞骨架即肌動(dòng)蛋白絲形貌。細(xì)胞接種4h后，四組材料表面細(xì)胞均呈現(xiàn)多形性，鋪展面積均增大，但Ti-

5、5wt％Cu組相對(duì)大于Ti、Ti-2wt％Cu、Ti-10wt％Cu組，此時(shí)Ti-5wt％Cu與Ti-10wt％Cu組可清晰觀察到細(xì)胞骨架即肌動(dòng)蛋白絲形貌。細(xì)胞接種24h后，四組材料表面細(xì)胞均已充分鋪展，鋪展面積明顯增大，均可清晰觀察到細(xì)胞骨架即肌動(dòng)蛋白絲形貌，但仍是Ti-5wt％Cu鋪展面積最大。
　　2.成骨細(xì)胞的增殖檢測(cè)
　　通過MTT檢測(cè)，成骨細(xì)胞接種1、3、5、7d后，四組材料表面的細(xì)胞數(shù)量均隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增多

6、，在四個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)，四組材料表面成骨細(xì)胞的增殖情況由高到低排列均為:Ti-10wt％Cu組＞Ti-5wt％Cu組＞Ti-2wt％Cu組＞Ti組，四組之間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），第7d時(shí)，Ti-10wt％Cu與Ti-5wt％Cu兩組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.成骨細(xì)胞的遷移情況分析
　　采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，通過Imagepro plus軟件測(cè)量劃痕平均寬度，細(xì)胞劃痕24h及48h后，劃痕平均寬度為Ti組＞Ti-2wt