研究肺癌細胞EMT發(fā)生前后對成骨細胞的影響.pdf

1、目的:應(yīng)用微流控芯片技術(shù)，構(gòu)建一個人肺腺癌細胞A549、成纖維細胞WI38及人成骨細胞hFOB共培養(yǎng)模型。研究成纖維細胞WI38對肺癌細胞A549發(fā)生EMT的促進作用，以及發(fā)生EMT的A549細胞對hFOB細胞表達RANKL蛋白的影響（RANKL可促進破骨細胞成熟），進而比較A549細胞發(fā)生EMT前后影響成骨細胞hFOB該蛋白表達的差異，為臨床干預(yù)腫瘤細胞EMT發(fā)生及緩解肺癌骨轉(zhuǎn)移引起的溶骨性癥狀提供治療參考。
　　方法:應(yīng)用微流

2、控芯片技術(shù)，構(gòu)建一個共培養(yǎng)平臺，芯片結(jié)構(gòu)包括微通道，細胞培養(yǎng)室，進液孔與出液孔。在芯片中分別培養(yǎng)包括肺腺癌細胞A549、成纖維細胞WI38、成骨細胞hFOB在內(nèi)的3種細胞系。實驗對象共分為3組，分別為對照組:hFOB單獨培養(yǎng)，實驗組1:A549與人類成骨細胞hFOB共培養(yǎng)以及實驗組2:發(fā)生EMT的A549與hFOB共培養(yǎng)。通過免疫熒光方法分別檢測對照組、實驗組1、實驗組2中人類成骨細胞hFOB膜蛋白RANKL的表達差異，并通過常規(guī)Tra

3、nswell侵襲實驗、Western blot檢測對芯片結(jié)果進行驗證。
　　結(jié)果:1.將腫瘤細胞細胞A549與成纖維細胞WI38共培養(yǎng)后，可見A549發(fā)生EMT轉(zhuǎn)化。相關(guān)蛋白如E-Cadherin表達降低、Snail表達升高。Transwell實驗結(jié)果顯示，發(fā)生EMT的A549侵襲能力增強。
　　2.將發(fā)生EMT的A549與成骨細胞hFOB共培養(yǎng)，E-Cadherein與Snail表達降低。Transwell實驗證明細胞具有

4、向靶器官侵襲能力。
　　3.將對照組、實驗組1、實驗組2分別提取蛋白，行Western blot檢測成骨細胞RANKL蛋白，結(jié)果顯示A549細胞發(fā)生EMT前后均可使成骨細胞RANKL表達升高。
　　結(jié)論:本實驗通過微流控芯片技術(shù)，成功建立細胞共培養(yǎng)體系，模擬了腫瘤微環(huán)境中成纖維細胞WI38對肺癌細胞A549的促EMT作用，并比較了A549發(fā)生EMT前后對成骨細胞hFOB的影響，從而證實A549細胞發(fā)生EMT前后均有促進溶骨性