BRCA1結(jié)合蛋白BRAP促進食管癌侵襲轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：腫瘤轉(zhuǎn)移是癌癥患者死亡的主要原因，但其分子機制并未完全闡明。多項研究已經(jīng)表明與腫瘤發(fā)生相關(guān)的基因也可能影響腫瘤的轉(zhuǎn)移。因此本課題研究的目的是為了闡明實驗室前期通過全基因組關(guān)聯(lián)研究(Genome-wide association study,GWAS)發(fā)現(xiàn)的易感基因能否影響腫瘤的轉(zhuǎn)移。
　　方法：首先運用高通量siRNA文庫結(jié)合細胞遷移實驗對食管癌11個易感區(qū)段內(nèi)的47個基因進行篩選及功能注釋。利用慢病毒載體在食管癌細胞(KY

2、SE30和KYSE150)以及HeLa細胞中將遷移相關(guān)基因進行敲降和過表達，體外分析擾動其表達對細胞遷移和侵襲能力的影響。另外通過裸鼠尾靜脈注射癌細胞構(gòu)建裸鼠肺轉(zhuǎn)移瘤模型，體內(nèi)分析敲降其表達對腫瘤細胞在裸鼠肺部定植的影響。進一步通過熒光素酶報告基因系統(tǒng)、免疫熒光、免疫印跡以及免疫共沉淀等實驗，分析易感基因影響腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的分子機制。另外采用實時定量PCR、免疫印跡以及免疫組化的方法，從mRNA水平和蛋白水平上檢測易感基因在食管癌組織以及

3、癌旁組織中的表達情況，并通過Log-rank生存分析的方法，分析其表達和患者生存的關(guān)系。
　　結(jié)果：通過高通量篩選，發(fā)現(xiàn)BRAP(BRCA1結(jié)合蛋白)是一個腫瘤細胞遷移相關(guān)基因，敲降BRAP的表達能夠降低腫瘤細胞的遷移侵襲能力以及腫瘤細胞在裸鼠肺部的定植。高表達BRAP能夠促進腫瘤細胞的遷移侵襲能力，其機制是通過促進蛋白激酶PKCα和IKKβ的結(jié)合，使IKKβ發(fā)生磷酸化，進而激活NF-κB信號通路，最終促進NF-κB靶基因MMP9