2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、Fascin,一種肌動蛋白捆綁蛋白,近年來,在腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用越來越受到研究者的關(guān)注。有研究表明,在人類正常上皮組織,F(xiàn)ascin一般不表達或僅表達于基底層細胞。在人類的多種惡性腫瘤中,F(xiàn)ascin過表達,與癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān),與患者的預(yù)后差相關(guān)。有文獻報道,Ser39是Fascin高度保守的磷酸化位點,位于肌動蛋白絲結(jié)合位點1。Ser39磷酸化抑制 Fascin捆綁肌動蛋白絲成束。Fascin相互作用蛋白的鑒定是一重要科學問

2、題,將十分有助于深入揭示惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展分子機制。然而,迄今為止,關(guān)于Fascin相互作用蛋白鑒定的研究報道很少。鑒于此,在本課題組以往研究發(fā)現(xiàn),F(xiàn)ascin促進食管癌細胞侵襲移動等系列研究結(jié)果的基礎(chǔ)之上,本文擬一方面深入研究食管癌細胞中Fascin蛋白Ser39位點磷酸化修飾的功能,另一方面,嘗試從食管癌細胞中鑒定Fascin某種新的相互作用蛋白。基本情況見下。
  首先,將fascin編碼區(qū)全長插入質(zhì)粒pEGFP,構(gòu)建表達載

3、體pEGFP-fascin,并進一步利用 PCR重疊延伸法定點突變,構(gòu)建兩個 fascin/Ser39位點突變的表達載體, pEGFP-fascin/S39A和pEGFP-fascin/S39D。
  其次,將pEGFP-fascin、pEGFP-fascin/S39A和pEGFP-fascin/S39D等質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染食管癌細胞KYSE150,檢測癌細胞的移動與侵襲能力的變化,同時觀察F-actin微絲的分布情況。實驗結(jié)果表明,1

4、)與轉(zhuǎn)染空載體pEGFP相比,轉(zhuǎn)染pEGFP-fascin,使野生型Fascin高表達,食管癌細胞KYSE150的移動與侵襲能力明顯增強,F(xiàn)-actin微絲支撐的棘狀突起增多,F(xiàn)-actin微絲與GFP-Fascin之間共定位;2)與轉(zhuǎn)染 pEGFP-fascin相比,轉(zhuǎn)染pEGFP-fascin/S39A,使突變型 Fascin/S39A高表達,食管癌細胞 KYSE150的移動與侵襲能力進一步增強,F(xiàn)-actin微絲支撐的棘狀突起變得

5、更多、更尖和更長,F(xiàn)-actin微絲與GFP-Fascin之間依然共定位;3)與轉(zhuǎn)染pEGFP-fascin相比,轉(zhuǎn)染pEGFP-fascin/S39D,使突變型Fascin/S39D高表達,食管癌細胞KYSE150的移動與侵襲能力明顯減弱,由F-actin微絲支撐的棘狀突起明顯變少而且短小,F(xiàn)-actin微絲與GFP-Fascin之間僅部分共定位。
  再次,利用免疫共沉淀、SILAC標記與蛋白質(zhì)譜,在食管癌細胞KYSE180與

6、TE3中,鑒定Fascin相互作用蛋白。實驗結(jié)果提示,Annexin A2、GAPDH、Myosin-9、PCNA、Septin-2和Ubiquitin C等共21種蛋白,可能與Fascin存在著直接或間接的相互作用關(guān)系。
  最后,用免疫共沉淀和免疫印跡等方法,結(jié)合他人文獻報道,對上述的Annexin A2、Myosin-9和PCNA等候選Fascin相互作用蛋白給予了初步鑒定。
  總之,本文實驗研究證明,在食管癌細胞中

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