組織蛋白酶D在鼻咽癌細(xì)胞中相互作用蛋白的篩選與鑒定.pdf

1、目的：
　　篩選并鑒定鼻咽癌細(xì)胞中組織蛋白酶D(Cathepsin D, CTSD)的相互作用蛋白，初步了解CTSD在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　收集高轉(zhuǎn)移鼻咽癌5-8F細(xì)胞的總蛋白，采用免疫共沉淀結(jié)合凝膠電泳分離CTSD相互作用蛋白，應(yīng)用電噴霧四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜鑒定相互作用蛋白，結(jié)合基因本體論、功能聚類、信號(hào)通路、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析等生物信息學(xué)方法綜合分析CTSD相互作用蛋白，采用免疫共沉

2、淀結(jié)合Western blot方法對(duì)CTSD相互作用蛋白EGFR、HSP90A進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1、采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜方法篩選并鑒定了143個(gè)CTSD相互作用蛋白。
　　2、將143個(gè)CTSD相互作用蛋白進(jìn)行功能聚類分析顯示：其中70個(gè)CTSD相互作用蛋白根據(jù)功能聚為12類，主要涉及到以下幾個(gè)方面：跨膜運(yùn)輸、細(xì)胞骨架、氧化磷酸化、蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)到、氧化還原酶活性、分子伴侶、糖代謝等。另外73

3、個(gè)CTSD相互作用蛋白未參與聚類。
　　3、將143個(gè)CTSD相互作用蛋白進(jìn)行 GO分析，結(jié)果如下：GO_BP分析顯示CTSD相互作用蛋白生物學(xué)過程主要涉及到應(yīng)激反應(yīng)、負(fù)調(diào)控、代謝過程、運(yùn)輸過程、蛋白定位及轉(zhuǎn)運(yùn)過程；GO_MF分析顯示CTSD相互作用蛋白分子功能主要涉及到蛋白結(jié)合、催化活性、嘌呤核苷酸綁定、核苷酸結(jié)合、細(xì)胞骨架、氧化還原酶活性、結(jié)構(gòu)分子活性等；GO_CC分析顯示CTSD相互作用蛋白亞細(xì)胞定位于膜、細(xì)胞器、囊泡、高分

4、子復(fù)合物中等。
　　4、KEGG和Biocarta信號(hào)通路分析顯示：143個(gè)CTSD相互作用蛋白涉及2條Biocarta信號(hào)通路包括低氧誘導(dǎo)因子相關(guān)信號(hào)通路，端粒、端粒酶、細(xì)胞老化；9條KEGG信號(hào)通路：氧化磷酸化、丙酮酸代謝、糖酵解信號(hào)通路、粘附連接、抗原處理和遞呈、丙酸代謝、核糖體信號(hào)通路、磷酸戊糖信號(hào)通路。
　　5、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析顯示：EGFR、HSP90A蛋白與CTSD形成相互作用組。
　　6、應(yīng)用免疫

5、共沉淀結(jié)合Western blot顯示EGFR、HSP90A與CTSD結(jié)合，驗(yàn)證了質(zhì)譜結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)論：
　　1、本研究采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析在鼻咽癌細(xì)胞中鑒定了143個(gè)CTSD的相互作用蛋白，為進(jìn)一步研究CTSD蛋白的功能提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　2、生物信息學(xué)綜合分析發(fā)現(xiàn)，EGFR、HSP90A蛋白與CTSD在鼻咽癌細(xì)胞中形成相互作用組，可能在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。
　　3、應(yīng)用免疫共沉淀結(jié)合