Dysbindin-1在小鼠睪丸組織中相互作用蛋白的篩選及鑒定.pdf

1、目的：通過篩選并鑒定（肌）營養(yǎng)不良短小蛋白結(jié)合蛋白1（dystrobrevin binding protein1，dysbindin-1）在睪丸組織中的相互作用蛋白，研究dysbindin-1在睪丸中的可能功能。
　　方法：在Rosetta（DE3）菌種中誘導(dǎo)表達可溶性GST-dysbindin-1融合蛋白，經(jīng)谷胱甘肽-瓊脂糖珠親和純化后，與小鼠的睪丸組織蛋白孵育進行GST pull-down實驗，通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC MS

2、/MS）分析篩選dysbindin-1在睪丸組織中的相互作用蛋白。利用BioGPS數(shù)據(jù)庫聚類睪丸組織中高表達和特異性表達的互作蛋白，運用DAVID6.8在線分析工具從細胞組分、分子功能、生物學(xué)過程和京都基因與基因組百科全書通路等方面對篩選出的互作蛋白進行GO（gene ontology）富集分析。選擇我們感興趣的潛在互作蛋白囊泡分選蛋白4A（vacuolar protein sorting4A，vps4a），通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建原核和真

3、核表達載體，運用GST pull-down、免疫共沉淀等實驗，驗證dysbindin-1與vps4a的互作關(guān)系。
　　結(jié)果：⑴共篩選出108個dysbindin-1在睪丸組織中的潛在互作蛋白，其中98個為尚未報道的dysbindin-1互作蛋白，7個為睪丸高表達蛋白，5個為睪丸特異性表達蛋白。⑵DAVID6.8在線分析工具GO富集分析發(fā)現(xiàn)：這些候選蛋白主要分布在細胞質(zhì)、細胞核、細胞膜、細胞外泌體等細胞組分中，通過與蛋白質(zhì)、核酸等分