STMN1基因在食管癌侵襲轉移及治療中作用機理研究.pdf

1、食管癌是世界常見腫瘤之一，其早期癥狀不明顯，診斷時多為中晚期，易發(fā)生淋巴結轉移。越來越多的研究表明，stathmin在多種腫瘤中高表達，并與腫瘤淋巴結轉移、病理分期、不良預后、腫瘤耐藥等多種臨床參數相關。然而，stathmin在促進食管癌進程的相關機理尚不清楚，有待深入研究。
　　本論文由兩部分組成，第一部分揭示了stathmin促進食管癌細胞體內外侵襲轉移和增殖。本研究基于前期實驗室通過蛋白質組學技術發(fā)現stathmin在食管癌

2、組織中的水平顯著升高。檢測食管癌患者血清stathmin水平，發(fā)現stathmin血清水平顯著升高，并與患者淋巴結轉移相關，提示stathmin與食管癌轉移具有相關性。通過構建穩(wěn)定過表達stathmin細胞系，采用劃痕、Transwell和集落形成等實驗證實stathmin促進食管癌細胞體外侵襲轉移和增殖。為了進一步探索stathmin促進食管癌細胞轉移的機制，采用轉錄組實驗分析stathmin過表達細胞內的分子水平變化。采用實時定量P

3、CR驗證，結果顯示stathmin過表達細胞內黏附相關分子NT5E、LYPD3、CLCA2、CEACAM5、FAK、RASSF5、FN和中間纖維家族分子KRT6C、KRT15、KRT17、KRT13的mRNA水平顯著升高。黏附實驗分析顯示過表達stathmin食管癌細胞與細胞外基質的黏附能力增強。免疫印跡分析，發(fā)現stathmin過表達細胞內integrinα5β1、FAK及P-ERK蛋白水平升高，而integrinβ3、β4、β5、v

4、inculin及ERK的水平無顯著;此外keratin17的蛋白水平亦顯著升高。敲降stathmin表達，integrinα5β1、FAK及P-ERK蛋白水平降低，ERK無顯著改變。然而，敲降FAK、或封閉integrinα5活性，可抑制細胞與外基質的黏附;敲降FAK或抑制ERK磷酸化，可抑制細胞的移行。以上結果提示integrinα5β1/FAK/ERK通路在stathmin過表達細胞移行中發(fā)揮重要作用。論文第一部分揭示了stathm

5、in促進食管癌細胞侵襲轉移的機理。
　　論文第二部分揭示了過表達stathmin降低食管癌細胞對紫杉醇化療敏感性?；趕tathmin在細胞內具有調控微管穩(wěn)定的活性，通過構建穩(wěn)定過表達stathmin的食管癌細胞，發(fā)現stathmin過表達顯著增強食管癌細胞對紫杉醇的耐受性，在相同處理條件下，紫杉醇對過表達stathmin細胞的抑制率顯著下降。紫杉醇通過誘導caspase8、caspase9的活化，激發(fā)食管癌細胞凋亡，未見自噬相關