Afatinib對T790M介導(dǎo)一代EGFR-TKI耐藥非小細(xì)胞肺癌的放射增敏分子機(jī)制研究及其在肺癌腦轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、第一部分
　　Afatinib作為第二代表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)，已有證據(jù)顯示其對EGFR敏感型突變非小細(xì)胞肺癌患者療效確切。然而，afatinib聯(lián)合包括放療在內(nèi)其它治療未被詳細(xì)研究。本研究中，我們通過長期逐級暴露于gefitinib建立了gefitinib耐藥細(xì)胞株P(guān)C-9-GR細(xì)胞，建立的PC-9-GR細(xì)胞發(fā)生獲得性T790M突變。Afatinib顯著增加了攜帶獲得性T790M突變的PC-9-GR

2、放療反應(yīng)，而對原發(fā)T790M突變的H1975和EGFR野生型的H460細(xì)胞無明顯作用。在PC-9-GR細(xì)胞中，afatinib阻斷了EGFR和ERK的磷酸化，并造成放療后AKT磷酸化延遲。Afatinib也導(dǎo)致PC-9-GR細(xì)胞放療后凋亡增加，抑制DNA損傷修復(fù)功能，并在移植瘤模型中增強(qiáng)了放療的抑瘤效果。本研究提示afatinib可能對攜帶獲得性T790M突變非小細(xì)胞肺癌是一種有潛力的放療增敏劑，也為以后臨床應(yīng)用afatinib聯(lián)合放療

3、提供了理論支撐。
　　第二部分
　　臨床上發(fā)現(xiàn)afatinib能夠治療腦轉(zhuǎn)移，但具體的機(jī)制尚不清楚。本研究評價(jià)afatinib治療腦轉(zhuǎn)移的療效并評估其穿透血腦屏障的能力以及作用靶點(diǎn)。本研究利用建立的小鼠腦轉(zhuǎn)移模型，對腫瘤負(fù)荷每周測量一次。腫瘤生長抑制率用TGI=[1-（治療組腫瘤大小變化/對照組腫瘤大小變化）×100％]表示。我們同時(shí)測定afatinib的藥動藥效學(xué)參數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)15 mg/kg和30 mg/kg afati

4、nib能夠顯著抑制PC-9細(xì)胞增殖，第14天時(shí)TGI分別為90.2％和105％。血漿afatinib濃度在給予30mg/kg的afatinib后，0.5h濃度為91.4±31.2 nmol/L，1h后達(dá)到峰值為417.1±119.9nmol/L，然后逐漸下降。腦脊液中afatinib濃度與血漿類似。Afatinib在血漿和腦脊液的半衰期分別為5.0 h和3.7 h。血漿和腦脊液的AUC(0-24h)分別為2375.5nmol/h和29.

5、1 nmol/h。血漿和腦脊液afatinib濃度呈正相關(guān)(r=0.844，p＜0.01)。免疫組化顯示pEGFR信號在給予30 mg/kg afatinib1h后降低了90％。藥效學(xué)分析顯示Emax為86.5％，EC50為0.26 nmol/L。腦脊液afatinib濃度和pEGFR之間存在負(fù)相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)afatinib能夠透過血腦屏障抑制肺癌腦轉(zhuǎn)移瘤。腦脊液濃度與血漿濃度相關(guān)，并進(jìn)一步抑制了腦腫瘤組織EGFR磷酸化。我們的研究為