原發(fā)性輕鏈型淀粉樣變的基因譜及其與臨床相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性輕鏈型淀粉樣變(pAL)是一種免疫球蛋白輕鏈沉積在各個組織器官內(nèi)造成多器官損害的單克隆漿細(xì)胞病。臨床表現(xiàn)取決于受累器官，可包括限制性心肌病、腎病綜合征、肝功能衰竭和自主神經(jīng)病變等。目前已知pAL主要是亞單位蛋白質(zhì)發(fā)生了構(gòu)象改變所致，但發(fā)生構(gòu)象改變的機(jī)制依舊不明。二代測序技術(shù)(Next generation sequencing)以其高通量、高時效和低成本三大特點，開始越來越多地應(yīng)用于臨床研究。對于血液系統(tǒng)腫瘤，尤

2、其是罕見病種，尋找其腫瘤細(xì)胞特異性的基因突變，進(jìn)而進(jìn)行診斷及治療研究，已經(jīng)成為該領(lǐng)域的重要研究手段。但是，目前pAL的基因譜及相應(yīng)基因突變與臨床相關(guān)性方面都還缺乏系統(tǒng)的研究。
　　方法：
　　收集2015年12月至2017年5月在北京協(xié)和醫(yī)院確診為pAL的初治患者48例，收集患者骨髓標(biāo)本和外周血標(biāo)本，并隨訪收集患者的臨床資料。采用CD138免疫磁珠分選得到純化的骨髓漿細(xì)胞，再使用DNA Kit提取骨髓漿細(xì)胞和外周血單個核細(xì)胞

3、DNA，以自身外周血作為正常對照，對10例pAL患者進(jìn)行全外顯子組測序。篩選出高頻突變基因和已知驅(qū)動基因，同時結(jié)合文獻(xiàn)報告過的pAL相關(guān)突變基因建立靶向基因譜。之后，擴(kuò)大樣本量對48例pAL患者的骨髓漿細(xì)胞進(jìn)行靶向基因測序。通過比較基因突變數(shù)量和不同基因的突變情況來探索pAL基因譜與臨床特征的相關(guān)性。采用SPSS22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，當(dāng)p＜0.05時認(rèn)為存在統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　本研究對10例患者進(jìn)行全外顯子組測

4、序，共檢測到3307個SNVs，外顯子編碼區(qū)占14.3％，其中非同義突變占69.5％(錯義突變63.6％，stopgain5.5％，stoploss0.4％)。這10例患者骨髓漿細(xì)胞樣本的平均每Mbp堿基發(fā)生非同義突變數(shù)為:1.22(0.15-3.08)Mutations/Mb。當(dāng)FDR值＜0.2，共得到12個高頻突變基因，其中有4個影響NF-κB信號通路，包括DUSP2，NFKBIA，KRAS,BIRC3，證明NF-κB信號通路可能在

5、pAL發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。綜合全外顯子組測序的結(jié)果，篩選FDR值＜1，我們得到出52個高頻突變基因和17個已知驅(qū)動基因，并通過查閱文獻(xiàn)篩選出29個已在pAL中報道過的突變基因，建立了共含98個基因的靶向基因譜。
　　進(jìn)一步對48例患者進(jìn)行了上述98個基因的靶向測序，得到133個單核苷酸變異(SNVs)和20個插入/缺失突變(InDel)。48例患者中有41例患者(85％)存在至少一個SNVs或者InDel?？傮w突變頻率較低，平

6、均每個患者的突變個數(shù)為3（0-13）個。共檢測出70個突變基因。IGLL5是最常見的突變基因(17％)，其次是ASCC3(15％)，還有14例患者(29.2％)存在NF-κB信號通路相關(guān)基因的突變。高危組（Mayo2012分期3期和4期）患者的平均基因突變個數(shù)明顯高于低危組（Mayo2012分期1期和2期）患者（3.8±0.5vs2.1±0.5個，p=0.021）。總生存期(OS)與基因突變的數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，存在4個或以上突變的患者的預(yù)計

7、1年存活率為52.1％，而不足4個突變的患者的預(yù)計1年生存率為90.4％(p=0.005)。當(dāng)與Mayo2012分期（曲線下面積AUC=0.870）相比時，綜合測序結(jié)果的預(yù)后模型增加了預(yù)測潛力(AUC=0.915)。研究還發(fā)現(xiàn)pAL中存在4個重復(fù)突變:ASB15(c.844C＞T)、ASCC3(c.1595A＞G)、HIST1H1E(c.311C＞T)、和KRAS(c.35G＞A)。預(yù)后分析表明存在ASB15或HIST1H1E突變患者的

8、預(yù)后不良(p＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　pAL骨髓漿細(xì)胞的總體突變頻率較低?；蛲蛔償?shù)量與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，當(dāng)基因突變個數(shù)≥4個時，其預(yù)后明顯更差。綜合基因突變數(shù)量與Mayo2012分期的預(yù)后模型具有更高的預(yù)測價值。高頻突變基因中存在4個與NF-κB信號通路相關(guān)基因(DUSP2、NFKBIA、KRAS、和BIRC3)，提示NF-κB信號通路的激活可能與pAL的發(fā)病機(jī)制相關(guān)。研究還發(fā)現(xiàn)了4個重復(fù)突變基因:ASB15、AS