Smac類似物Birinapant在非小細(xì)胞肺癌的放療增敏作用研究.pdf

1、目的:通過體外實(shí)驗(yàn)觀察Birinapant通過抑制IAP蛋白家族成員c-IAP1、c-IAP2從而對(duì)非小細(xì)胞肺癌的輻射增敏作用。
　　方法:(1)取對(duì)數(shù)生長期得肺癌細(xì)胞H1299。分別設(shè)為對(duì)照組，Birinapant單獨(dú)處理組，γ射線單獨(dú)照射組，Birinapant聯(lián)合γ射線照射組。MTT法檢測Birinapant對(duì)非小細(xì)胞肺癌的毒性;流式細(xì)胞術(shù)檢測Birinapant對(duì)非小細(xì)胞肺的增敏作用，克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測Birinapant對(duì)

2、非小細(xì)胞肺癌的增敏作用和增敏比。(2) Westernblot和RT-PCR實(shí)驗(yàn)觀察Smac、c-IAP1、c-IAP2的蛋白水平變化以及mRNA的表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:(1)克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)表明六種肺癌細(xì)胞(A549，H460，H1299，H358，HCC827，H1650)輻射敏感性的為A549和H1299細(xì)胞輻射抗性最強(qiáng)，H358抗性最低。Western blot實(shí)驗(yàn)和RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測六種細(xì)胞內(nèi)c-IAP1

3、、c-IAP2蛋白水平高低。結(jié)果表明c-IAP1、c-IAP2在A549、H1299中表達(dá)量較高，而H460、H358，HCC827，H1650這4種肺癌細(xì)胞中表達(dá)較少;表明c-IAP1、c-IAP2與肺癌細(xì)胞的輻射敏感性有關(guān)。(2)不同濃度的Birinapant對(duì)非小細(xì)胞肺癌H1299的毒性有不同:和對(duì)照組相比，低于1μM濃度的Birinapant對(duì)肺癌細(xì)胞有較微弱的毒性，但是在濃度大于10μM之后，對(duì)非小細(xì)胞肺癌的毒性不呈劑量依賴的

4、關(guān)系。8Gyγ射線聯(lián)合Birinapant后24h檢測凋亡水平，聯(lián)合組凋亡水平明顯高于單純照射組(P＜0.01)?？寺⌒纬蓪?shí)驗(yàn)證明Birinapant能夠增加肺癌細(xì)胞H1299對(duì)輻射的敏感性。(3) Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示c-IAP1、c-IAP2發(fā)生明顯降解，但是其mRNA水平?jīng)]有明顯下降，說明Birinapant是通過直接調(diào)節(jié)蛋白水平的變化而非其轉(zhuǎn)錄水平的變化。
　　結(jié)論:在肺癌細(xì)胞中c-IAP1、c-IAP2蛋