葉酸-殼聚糖載藥DAC影響SCC-9細(xì)胞p16基因甲基化狀態(tài)的意義.pdf

1、目的:研究葉酸偶聯(lián)殼聚糖攜帶5'-氮雜-2'-脫氧胞苻（5-aza-2deoxycytidine,地西他濱,DAC）納米粒對(duì)比5'-氮雜-2'-脫氧胞苷作用于體外培養(yǎng)的人鱗狀上皮舌癌SCC-9細(xì)胞,了解葉酸偶聯(lián)殼聚糖載藥DAC對(duì)SCC-9細(xì)胞的p16基因和p16蛋白的表達(dá)情況,及對(duì)SCC-9細(xì)胞的抑制作用,從而探索葉酸偶聯(lián)殼聚糖載藥納米粒攜DAC對(duì)細(xì)胞的p16基因的高甲基化狀態(tài)的還原能力的有效性,以及同時(shí)了解載藥系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞提高藥效的能力

2、。
　　方法:合成葉酸殼聚糖載藥DAC納米粒,測(cè)其zeta電位證實(shí)其為穩(wěn)定的納米顆粒后,將SCC-9細(xì)胞分為0、1、2、3、4、5、6、7八組。2、3、4組選用三個(gè)梯度濃度1×10-7mol/L、1×10-6 mol/L、1×10-5mol/L的DAC進(jìn)行處理細(xì)胞,5、6、7組采用同樣三個(gè)濃度梯度1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L的葉酸殼聚糖載藥DAC納米粒處理細(xì)胞,0組為空白生理鹽水對(duì)照組,1

3、組為空白葉酸殼聚糖處理組,0組內(nèi)設(shè)3個(gè)濃度的組內(nèi)對(duì)照a、b、c,1組內(nèi)設(shè)3個(gè)組內(nèi)對(duì)照,為e、f、c組。觀察葉酸殼聚糖載藥DAC納米顆粒對(duì)比DAC作用細(xì)胞,用MTT法測(cè)各組藥物處理細(xì)胞5天內(nèi)的SCC-9細(xì)胞抑制率;藥物各自作用48小時(shí)后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)細(xì)胞中p16基因mRNA的表達(dá)和應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)細(xì)胞p16的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:MTT結(jié)果表明相同濃度的葉酸-殼聚糖載藥DAC納米顆粒組藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率高于同樣濃度

4、下的DAC組(P＜0.05),且藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率均與藥物濃度呈正相關(guān)關(guān)系。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示2、3、4、5、6、7組的p16基因mRNA表達(dá)量顯著高于0、1組(P＜0.05)。0組和1組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。相同濃度的葉酸-殼聚糖載藥DAC納米顆粒組的p16基因的mRNA表達(dá)量高于同樣濃度下的DAC組(P＜0.05);免疫組化結(jié)果顯示,2、3、4、5、6、7組相較于0、1組呈強(qiáng)陽性表達(dá),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),相

5、同濃度的葉酸-殼聚糖載藥DAC納米顆粒組的p16蛋白的表達(dá)量高于同樣濃度下的DAC組并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),0組和1組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1.葉酸-殼聚糖載藥納米粒攜帶DAC和DAC均對(duì)SCC-9細(xì)胞有明顯的去甲基化能力。
　　2.葉酸-殼聚糖載藥納米粒攜帶DAC對(duì)比DAC具有更高效逆轉(zhuǎn)SCC-9細(xì)胞p16基因甲基化狀態(tài),并具有促使p16基因mRNA和蛋白恢復(fù)表達(dá)的作用。
　　3.葉酸