地西他濱對(duì)人鱗狀上皮舌癌SCC-9細(xì)胞P16基因甲基化狀態(tài)及mRNA和蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、目的：本研究主要探討DNA甲基化抑制劑地西他濱(5-aza-2 deoxycytidine DAC)對(duì)體外培養(yǎng)的人鱗狀上皮舌癌SCC-9細(xì)胞P16基因甲基化狀態(tài)及mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響，探討其抗腫瘤作用及其可能機(jī)理。
　　方法：實(shí)驗(yàn)將體外培養(yǎng)的處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人鱗狀上皮舌癌SCC-9細(xì)胞分為0、1、2、3四組。1、2、3三組樣本采用三個(gè)梯度濃度的DAC（1×l0-7mol/L、1×l0-6mol/L、1×l0-5mol/L）

2、DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行處理，取不含DAC的等量培養(yǎng)液處理的0組作為對(duì)照組。細(xì)胞培養(yǎng)至48小時(shí)后，使用熒光甲基化特異聚合酶鏈反應(yīng)Q-MSP技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組SCC-9細(xì)胞中P16基因甲基化狀態(tài)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)SCC-9細(xì)胞P16基因mRNA的表達(dá)水平；應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)SCC-9細(xì)胞P16的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：用不同濃度的DAC作用于SCC-9細(xì)胞處理48h后，Q-MSP檢測(cè)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中SCC-9細(xì)胞P

3、16基因甲基化與非甲基化呈雜合狀態(tài)。用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)四組P16基因的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組中SCC-9細(xì)胞P16基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組（2一△△cr＞l），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。免疫組化結(jié)果顯示經(jīng)DAC處理過(guò)后，P16蛋白較對(duì)照組呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，空白對(duì)照組未見(jiàn)有蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1、DAC可能具有逆轉(zhuǎn)人鱗狀上皮舌癌SCC-9細(xì)胞P16基因甲基化作用；
　　2、DAC可能通