鴉膽子苦醇通過調(diào)節(jié)Nrf2增強(qiáng)A549細(xì)胞系輻射敏感性的研究.pdf

1、目的:比較三種肺癌細(xì)胞系(H1299，A549，H460)的輻射敏感性，并研究鴉膽子苦醇對輻射抗性較強(qiáng)細(xì)胞系A(chǔ)549的增敏作用。
　　方法:MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)比較H1299，A549，H460三種細(xì)胞系的輻射敏感性;彗星實(shí)驗(yàn)比較A549，H460兩種細(xì)胞系經(jīng)8Gy照射后2小時DNA損傷程度;蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)比較H1299，A549，H460三種細(xì)胞系中Nrf2蛋白水平;qRT-PCR結(jié)合蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)檢測siRNA干擾A549細(xì)胞

2、系Nrf2后Nrf2和NQO1轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的變化;蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)檢測8Gy照射后A549細(xì)胞內(nèi)Nrf2的變化;AnnixinⅤ-FITC/PI標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞照射后細(xì)胞凋亡率;MTT實(shí)驗(yàn)檢測鴉膽子苦醇對H1299和A549細(xì)胞系的細(xì)胞毒性;蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)檢測鴉膽子苦醇在A549細(xì)胞系中對Nrf2的抑制作用以及A549細(xì)胞給予鴉膽子苦醇聯(lián)合照射后Nff2蛋白水平變化;彗星實(shí)驗(yàn)檢測鴉膽子苦醇聯(lián)合照射對A549細(xì)胞系造成的DNA損傷;

3、DCFH-DA探針結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測檢測鴉膽子苦醇聯(lián)合照射對A549細(xì)胞系內(nèi)活性氧ROS的影響;MTT和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測鴉膽子苦醇對A549細(xì)胞系的輻射增敏效果。
　　結(jié)果:MTT檢測細(xì)胞存活率和克隆形成率顯示H1299，A549，H460三種細(xì)胞系輻射抗性依次由強(qiáng)到弱;彗星實(shí)驗(yàn)證明經(jīng)照射后H460比A549細(xì)胞系DNA損傷嚴(yán)重;蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)顯示H1299，A549，H460三種細(xì)胞系中Nrf2在A549細(xì)胞系中含量最高，H12

4、99和H460相對較少;照射會導(dǎo)致A549細(xì)胞系內(nèi)Nrf2蛋白總量升高;流式細(xì)胞術(shù)檢測到siRNA干擾A549細(xì)胞系中Nrf2后會增加由照射引起的細(xì)胞凋亡;鴉膽子苦醇可以有效降低A549細(xì)胞系中的Nrf2蛋白含量，抑制由照射引起的Nrf2蛋白含量升高;進(jìn)而可以增加A549由照射引起的DNA損傷和活性氧，起到增強(qiáng)A549細(xì)胞系輻射敏感性的作用。
　　結(jié)論:H1299，A549，H460三種細(xì)胞系的輻射抗性依次減弱。不同非小細(xì)胞肺癌細(xì)