多發(fā)性硬化導致的膀胱功能障礙以及雌激素對其治療作用的研究.pdf

1、背景和目的：
　　多發(fā)性硬化導致的膀胱功能障礙是泌尿系統(tǒng)里面極為復雜的疾病。多發(fā)性硬化會給中樞神經系統(tǒng)帶來多樣的病理變化，與此同時會出現(xiàn)各個系統(tǒng)臨床癥狀。對于泌尿系統(tǒng)，由于受損的泌尿系功能相關的神經病變部位以及受損傷程度不同也會導致泌尿系統(tǒng)功能也將出現(xiàn)各種變化，其中膀胱功能障礙主要表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿潴留、尿失禁等。目前對于多發(fā)性硬化這個疾病本身的研究較多，而關于多發(fā)性硬化神經源性膀胱研究則較少.治療方法上面也是主要以控制癥狀，改

2、善泌尿系統(tǒng)功能為主，比如間歇導尿、抗膽堿藥物、肉毒素、辣椒素、手術等等，治療效果并不理想，針對多發(fā)硬化的治療如免疫抑制劑、免疫球蛋白注射、血漿置換以及β-干擾素等效果也不能讓人們完全滿意，因此需要一種新的同時針對多發(fā)性硬化和神經源性膀胱的治療方法。近期有研究表明男女性別的差異會造成自身免疫性疾病發(fā)病差別，女性患者多發(fā)性硬化的患者是男性的2倍，女性懷孕后期多發(fā)性硬化發(fā)病率降低到原來的20％，有研究表明雌性激素對多發(fā)性硬化有防止疾病進一步惡

3、化，促進神經修復的作用。另外還有報道證明雌激素受體在膀胱的分布，以及雌激素對女性膀胱結構和功能的影響，提示了雌激素在治療多發(fā)性硬化神經源性膀胱的潛在可能。本實驗通過實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）的動物模型觀察多發(fā)性硬化導致的膀胱功能障礙，并通過給予模型動物適量的雌激素處理，觀察模型動物變化情況，初步驗證雌激素在多發(fā)性硬化中神經源性膀胱的可能治療作用。

4、
　　實驗方法：
　　1.建立EAE小鼠模型：8-13周的C57BL/6雌性小鼠，應用200ug mog35-55，與等體積含CFA量為10mg/ml的完全弗氏佐劑混勻，完全乳化成乳劑，皮下兩點注射，于免疫當天及免疫后48小時腹腔注射400ng百日咳毒素誘導EAE小鼠模型。自免疫當天起，觀察并記錄大鼠體重變化、臨床表現(xiàn)及神經功能評分。
　　2.分組以及給藥：選取雌性C57BL6小鼠30只，隨機分10只對照組單純給予完全

5、費氏佐劑以及百日咳，10只為EAE模型組，10只為雌激素處理組，即在完成免疫處理后每日給予雌激素（50μmol/L）100μl皮下注射。
　　3.標本采集：在試驗23天時，將小鼠用10%水合氯醛麻醉后，取出膀胱組織，稱重，放入液氮中保存，然后取多聚甲醛進行全身灌流，取出小鼠脊髓組織用于制作石蠟切片。
　　4.相關指標檢測：Luxol fast blue（LFB）染色和蘇木素-伊紅（HE）染色觀察脊髓炎性細胞浸潤及脫髓鞘情況，

6、用Western-Blot檢測膀胱組織中雌激素受體蛋白表達變化情況。
　　結果：
　　1.EAE模型組的小鼠：神經功能臨床評分、體重、以及泌尿系統(tǒng)功能變化都具有典型的MS臨床表現(xiàn)，HE染色表現(xiàn)出較明顯相關的炎性細胞浸潤。LFB染色表現(xiàn)出了明顯的脊髓脫髓鞘現(xiàn)象。
　　2.在多發(fā)性硬化神經源性膀胱小鼠膀胱組織中，相對于對照組小鼠膀胱中雌激素受體明顯降低，給予雌激素治療后，雌激素受體表達略微上調。
　　3.在給予EAE

7、小鼠雌激素治療后，小鼠發(fā)病率降低，癥狀嚴重程度較未特殊處理的EAE小鼠輕，平均神經功能評分降低。
　　結論：
　　1.EAE神經系統(tǒng)臨床癥狀的評分與多發(fā)硬化性神經源膀胱的癥狀密切相關。
　　2.雌激素以及雌激素受體在多發(fā)硬化性神經源膀胱疾病中發(fā)生可能起到重要用。
　　3.在對EAE模型小鼠進行雌激素處理后，發(fā)病率以及癥狀嚴重程度相對于未經雌激素處理的模型組明顯降低，表明雌激素對多發(fā)性硬化導致神經源性膀胱有明顯的改