蒼耳子抑制乳腺癌細(xì)胞和1型單純皰疹病毒活性成分的研究.pdf

1、蒼耳子（Fructus Xanthii）是菊科植物蒼耳(Xanthium sibiricum Patr.ex Widd.)成熟帶總苞的干燥果實，被歷代中國藥典收載，在我國分布廣泛，是一種常用來治療鼻科疾病和風(fēng)寒頭痛的傳統(tǒng)中藥材。中藥蒼耳子含有多種化學(xué)成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，蒼耳子具有抗腫瘤、抗病毒、抑菌、抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化和降血糖等藥理作用。但是，并未對蒼耳子中抑制HSV的活性成分進(jìn)行研究，另外乳腺癌一直嚴(yán)重威脅著女性的生命健康，因而，

2、我們以蒼耳子為原料，以乳腺癌細(xì)胞MCF-7和1型單純皰疹病毒(HSV-1)為研究對象，對蒼耳子中抑制腫瘤細(xì)胞增殖和抑制病毒的活性成分進(jìn)行分離純化，以期篩選出活性成分。具體實驗內(nèi)容及結(jié)果見下文:
　　1.蒼耳子抑制腫瘤細(xì)胞增殖成分的分離純化及其活性檢測
　　實驗以抑制MCF-7細(xì)胞增殖為活性追蹤指標(biāo)，利用有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱色譜、半制備高效液相色譜(HPLC)和凝膠柱色譜對蒼耳子抗癌活性成分進(jìn)行分離純化?？拱┗钚院Y選過程中，采

3、用MTT法檢測各階段分離組分對MCF-7存活率的影響，并計算出IC50值，以IC50值評定它們抗癌活性的強(qiáng)弱。采用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測活性成分對MCF-7細(xì)胞凋亡的影響。
　　有機(jī)溶劑萃取分離后，獲得了3種提取物，分別是乙酸乙酯(EtOAC)萃取物、正丁醇(nBuOH)萃取物和水相提取物，經(jīng)過活性篩選，確定了EtOAC萃取物為活性組分，IC50值為225.71μg/ml; EtOAC萃取物經(jīng)硅膠柱層

4、析分離后，共得到了12個組分，其中EFd為最強(qiáng)活性組分，IC50值為35.98μg/ml; EFd組分經(jīng)半制備HPLC分離后，共得到了4個主要組分，其中EFd-3為活性組分，IC50值為23.27μg/ml;最后經(jīng)過凝膠柱層析分離，獲得了活性成分EFd-3-1，其IC50值為21.54μg/ml。流式細(xì)胞儀檢測表明EFd-3-1能夠濃度依賴性地促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的凋亡。
　　2.蒼耳子抑制病毒活性成分的分離純化及其活性檢測

5、　　實驗以抑制HSV-1病毒感染宿主Vero細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞病變?yōu)榛钚宰粉欀笜?biāo)，利用有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱色譜和半制備高效液相色譜(HPLC)對蒼耳子抑制病毒的活性部位進(jìn)行分離。在抑制病毒活性的篩選過程中，采用顯微鏡下肉眼觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)的方法檢測各階段分離組分對HSV-1致Vero細(xì)胞發(fā)生病變的影響，并計算出SI值，以SI值評定它們活性的強(qiáng)弱。
　　有機(jī)溶劑萃取分離后，獲得了EtOAC萃取物、nBuOH萃取物和水相提取物，經(jīng)