赤芝抗乳腺癌細胞增殖活性成分及其構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　赤芝Ganoderma Lucidum(Levss.Ex Fr.)為多孔菌科靈芝屬真菌靈芝的干燥子實體，是歷史悠久的名貴藥食兩用真菌之一。赤芝的抗腫瘤作用一直是研究熱點，赤芝富含羊毛甾烷型三萜酸和三萜醇，是赤芝抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。查閱文獻，與三萜酸比較，三萜醇的研究較少，為進一步豐富對赤芝三萜醇類化學成分的認識，明確其抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)與可能的作用機制，本論文開展對赤芝三萜醇富集部位進行研究，確定其抗腫瘤活性成分及

2、其構(gòu)效關(guān)系，初步闡明赤芝抗腫瘤活性部位的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　采用乙酸乙酯對赤芝干燥子實體進行回流提取得到提取物，采用反向ODS中低壓色譜進行初步分離，采用體外腫瘤細胞實驗評價赤芝提取物及分離部位抗腫瘤的活性。經(jīng)正相硅膠柱層析，反相ODS中低壓柱層析分離，制備高效液相色譜等多種化學分離手段對赤芝活性部位的化學成分進行分離純化，采用MS和NMR等波譜技術(shù)，對分離得到的化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定;利用細胞學方法對鑒定的化合物進行抗

3、人乳腺癌細胞MDA-MB-231和人肝癌細胞HepG2的活性測試，確定其IC50，活性評價結(jié)果的基礎(chǔ)上，用Discovery Studio構(gòu)建3D-QSAR模型預測其活性，用Pharmaceutical Target Seeker預測化合物活性最佳化合物GL6可能的作用靶點。
　　結(jié)果:
　　赤芝乙酸乙酯提取物對人乳腺癌細胞MDA-MB-231增殖具有較好的抑制作用，其下級分離部位活性為:靈芝醇富集部位(C)＞甾體和脂肪酸富

4、集部位(D)＞靈芝酸富集部位(B)＞水溶性部位(A)。從赤芝的抗腫瘤活性部位靈芝醇富集部位中分離得到15個化合物，他們分別是24(S)，25-dihy-droxylanost-8-en-3，7，11-trione(GL1)，ganodertriol M(GL2)，fornicin B(GL3)，lucidumol A(GL4),lucidudiol(GL5),12-methoxy-ganodermanondiol(GL6)，ganode

5、rmanontriol(GL7),(24R,25S)-ganodermanontriol(GL8)，lucidumol B(GL9),ganodermanondiol(GL10)，ganoderiol B(GL11)，ganoderiol D(GL12),ganoderiol F(GL13)，gargalol C(GL14)，fomentarol A(GL15)，其中，GL6為新化合物，GL8為新天然產(chǎn)物，GL14和GL15是首次從赤芝

6、中分離得到。GL6對于乳腺癌細胞MDA-MB-231增殖的抑制效果最好，其IC50為21.2±0.7μmol/mL，對于肝癌細胞HepG2的IC50為41.5±3.2μ mol/mL，GL1，GL4，GL5，GL8-GL10，GL12，GL13的IC50在50-170μ mol/mL，化合物GL2，GL3，GL7，GL11，GL14，GL15對于MDA-MB-231，HepG2兩種腫瘤細胞的增殖不具有明顯的抑制活性。利用Discover

7、y Studio3.1構(gòu)建的3D-QSAR模型，得到預測活性值和實驗活性值之間的相關(guān)系數(shù)r2=0.975。通過Pharmaceutical Target Seeker(PTS)技術(shù)預測得到GL6可能的靶點是TNF-α。
　　結(jié)論:
　　從赤芝乙酸乙酯提取物的靈芝醇富集部位中分離并鑒定了15個化合物，包括1個新化合物和1個新天然產(chǎn)物，新化合物GL6在體外的抗腫瘤活性最強。利用Discovery Studio3.1構(gòu)建的3D-Q