赤芝抗乳腺癌細(xì)胞增殖活性成分及其構(gòu)效關(guān)系研究.pdf

1、目的:
　　赤芝Ganoderma Lucidum(Levss.Ex Fr.)為多孔菌科靈芝屬真菌靈芝的干燥子實(shí)體，是歷史悠久的名貴藥食兩用真菌之一。赤芝的抗腫瘤作用一直是研究熱點(diǎn)，赤芝富含羊毛甾烷型三萜酸和三萜醇，是赤芝抗腫瘤作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。查閱文獻(xiàn)，與三萜酸比較，三萜醇的研究較少，為進(jìn)一步豐富對(duì)赤芝三萜醇類化學(xué)成分的認(rèn)識(shí)，明確其抗腫瘤的物質(zhì)基礎(chǔ)與可能的作用機(jī)制，本論文開展對(duì)赤芝三萜醇富集部位進(jìn)行研究，確定其抗腫瘤活性成分及

2、其構(gòu)效關(guān)系，初步闡明赤芝抗腫瘤活性部位的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　采用乙酸乙酯對(duì)赤芝干燥子實(shí)體進(jìn)行回流提取得到提取物，采用反向ODS中低壓色譜進(jìn)行初步分離，采用體外腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)赤芝提取物及分離部位抗腫瘤的活性。經(jīng)正相硅膠柱層析，反相ODS中低壓柱層析分離，制備高效液相色譜等多種化學(xué)分離手段對(duì)赤芝活性部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，采用MS和NMR等波譜技術(shù)，對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定;利用細(xì)胞學(xué)方法對(duì)鑒定的化合物進(jìn)行抗

3、人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和人肝癌細(xì)胞HepG2的活性測試，確定其IC50，活性評(píng)價(jià)結(jié)果的基礎(chǔ)上，用Discovery Studio構(gòu)建3D-QSAR模型預(yù)測其活性，用Pharmaceutical Target Seeker預(yù)測化合物活性最佳化合物GL6可能的作用靶點(diǎn)。
　　結(jié)果:
　　赤芝乙酸乙酯提取物對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖具有較好的抑制作用，其下級(jí)分離部位活性為:靈芝醇富集部位(C)＞甾體和脂肪酸富

4、集部位(D)＞靈芝酸富集部位(B)＞水溶性部位(A)。從赤芝的抗腫瘤活性部位靈芝醇富集部位中分離得到15個(gè)化合物，他們分別是24(S)，25-dihy-droxylanost-8-en-3，7，11-trione(GL1)，ganodertriol M(GL2)，fornicin B(GL3)，lucidumol A(GL4),lucidudiol(GL5),12-methoxy-ganodermanondiol(GL6)，ganode

5、rmanontriol(GL7),(24R,25S)-ganodermanontriol(GL8)，lucidumol B(GL9),ganodermanondiol(GL10)，ganoderiol B(GL11)，ganoderiol D(GL12),ganoderiol F(GL13)，gargalol C(GL14)，fomentarol A(GL15)，其中，GL6為新化合物，GL8為新天然產(chǎn)物，GL14和GL15是首次從赤芝

6、中分離得到。GL6對(duì)于乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231增殖的抑制效果最好，其IC50為21.2±0.7μmol/mL，對(duì)于肝癌細(xì)胞HepG2的IC50為41.5±3.2μ mol/mL，GL1，GL4，GL5，GL8-GL10，GL12，GL13的IC50在50-170μ mol/mL，化合物GL2，GL3，GL7，GL11，GL14，GL15對(duì)于MDA-MB-231，HepG2兩種腫瘤細(xì)胞的增殖不具有明顯的抑制活性。利用Discover

7、y Studio3.1構(gòu)建的3D-QSAR模型，得到預(yù)測活性值和實(shí)驗(yàn)活性值之間的相關(guān)系數(shù)r2=0.975。通過Pharmaceutical Target Seeker(PTS)技術(shù)預(yù)測得到GL6可能的靶點(diǎn)是TNF-α。
　　結(jié)論:
　　從赤芝乙酸乙酯提取物的靈芝醇富集部位中分離并鑒定了15個(gè)化合物，包括1個(gè)新化合物和1個(gè)新天然產(chǎn)物，新化合物GL6在體外的抗腫瘤活性最強(qiáng)。利用Discovery Studio3.1構(gòu)建的3D-Q