PGG抑制單純皰疹病毒1型核轉運及出核機制的研究.pdf

1、單純皰疹病毒1型(HSV-1)是皰疹病毒家族中的一員,它主要通過感染口唇,神經組織,以及皮膚(非生殖器)來侵入人體,正常情況下潛伏于體內。當機體免疫力下降,月經期間或情緒低落時有可能引起體內潛伏的皰疹病毒的激活。本實驗室前期發(fā)現從余甘子枝葉中所提取的五沒食子酰基葡萄糖酸(Pentagalloylglucose,PGG)在抑制HSV-1方面有良好的效果。
　　實驗目的:研究藥物PGG對單純皰疹病毒I型在宿主細胞內核轉運及出核過程的影

2、響,尋找對抗皰疹病毒株的新型藥物。
　　實驗方法:采用MTT檢測藥物毒性,空斑實驗檢測PGG對于HSV-1及幾種ACV-耐藥株的空斑抑制率及半數抑制濃度。
　　共聚焦觀察PGG能否影響HSV-1核轉運。RT-PCR檢測加藥后即刻早期基因ICP0,ICP4和UL54表達量的變化。通過RT-PCR和western-blot檢測PGG抑制病毒核轉運過程是否與HSP90、tubulin或Dynein有關。
　　檢測上清液中病毒

3、的TCID50,間接推斷加藥對病毒出核有無影響。構建攜帶病毒基因UL31和UL34的融合表達載體pEFGP-NI-UL31和pEFGP-NI-UL34。轉染重組質粒進入細胞,加藥后觀察兩個基因的定位與表達量是否受到PGG的影響。進一步通過RT-PCR和western-blot檢測其表達量。利用空斑實驗檢測病毒感染出核時期加藥,再通過轉染使UL31或UL34過表達,能否減輕PGG對病毒出核的抑制作用。
　　實驗結論:(1)PGG對臨