Tim-3和膽固醇對人乳腺癌細胞的作用Tim-3基因多態(tài)性與原發(fā)性血小板增多癥相關性研究.pdf

1、第一部分:Tim-3在人乳腺癌細胞中的表達及意義
　　研究目的:乳腺癌是外部環(huán)境、遺傳背景等多方面聯(lián)合作用導致的后果，深入研究其致病的分子生物機制，有利于找到更有效治療方法。T細胞免疫球蛋白及黏蛋白結構域分子-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3，Tim-3)是一種負性免疫調節(jié)分子，在腫瘤免疫中發(fā)揮重要的功能。本文旨在觀察Tim-3在人乳腺癌細

2、胞中的表達水平及其對細胞生物學行為的影響。
　　研究方法:通過Western檢測乳腺癌細胞株Tim-3的表達;瓊脂糖凝膠電泳和Western檢測Tim3-siRNA和ADV-Tim3對Tim-3的作用效果;利用CCK-8、劃痕、Transwell及Annexin V/FITC，檢測Tim-3對乳腺癌細胞的影響。
　　結果:Tim-3可表達于乳腺癌細胞上;siRNA阻斷Tim-3的表達后，乳腺癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力減弱，

3、早期凋亡率增加（P＜0.05）;ADV-Tim3上調Tim-3的表達后，細胞的增殖、遷移、侵襲能力增強，早期凋亡率降低（P＜0.05）。結論:Tim-3可表達于乳腺癌細胞上。Tim-3可促進乳腺癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力及抑制其早期凋亡，為乳腺癌的防治提供新靶點。
　　第二部分:膽固醇對人乳腺癌細胞的作用及機制研究
　　研究目的:有研究表明，肥胖和代謝綜合征是威脅乳腺癌發(fā)生發(fā)展的重要因素，高膽固醇血癥能夠導致乳腺癌的生長和

4、轉移。但是膽固醇引起的乳腺癌細胞反應目前尚未有研究證實。本試驗是在體外細胞水平上研究兩種濃度的膽固醇(20umol/L和40umol/L)對乳腺癌細胞的作用及其作用機制。
　　研究方法:利用CCK-8、劃痕、Transwell及Annexin V/FITC，檢測膽固醇對乳腺癌細胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的作用。通過siRNA和ADV-Tim3阻斷和促進Tim-3后，觀察膽固醇對乳腺癌細胞增殖和侵襲的作用。
　　結果:與對照組相

5、比，膽固醇20umol/L和40umol/L均可抑制乳腺癌細胞的增殖能力，促進遷移和侵襲，抑制早期凋亡(P＜0.05)。通過siRNA和ADV-Tim3阻斷或促進Tim-3表達后，發(fā)現(xiàn)無論阻斷還是上調Tim-3的表達，與對照組相比，膽固醇都會抑制細胞的增殖能力，促進細胞的侵襲能力(P＜0.05)。
　　結論:膽固醇能夠抑制乳腺癌細胞的增殖及早期凋亡、促進遷移和侵襲。膽固醇通過Tim-3非依賴途徑抑制乳腺癌的增殖及促進其侵襲。

6、>　　第三部分:Tim-3基因多態(tài)性與原發(fā)性血小板增多癥相關性研究
　　研究目的:T細胞免疫球蛋白及黏蛋白結構域分子-3(T cell immunoglobulin andmucin-domain containing molecule-3，Tim-3)優(yōu)先表達于終末分化的Th1細胞上，與其配體Galectin-9結合，可以誘導Th1細胞凋亡，抑制其分泌IFN-γ。有文獻表明，慢性炎癥狀態(tài)與MPNs的發(fā)生有關。Tim-3作為一個重

7、要的炎癥調控因子，可能與原發(fā)性血小板增多癥(essential thrombocythaemia，ET)的發(fā)生有關。本實驗旨在研究Tim-3基因三個單核苷酸多態(tài)性位點(SNPs)（-1516G＞T、-574G＞T和+4259T＞G）是否與ET患者的基因易感性有關。
　　研究方法:我們選取175例ET患者和151健康對照。利用PCR-RFLP方法分析-1516G＞T、-574G＞T和+4259T＞G三個位點的基因多態(tài)性。我們還研究了

8、每個單核苷酸多態(tài)性位點的基因型與ET危險因素的關系，包括血常規(guī)指標、年齡和JAK2V617基因突變。
　　結果:ET患者-1516G＞T、-574G＞T和+4259T＞G三個單核苷酸多態(tài)性位點的基因型和基因頻率分布與對照組相比有顯著的區(qū)別(P＜0.05)。單倍體分析發(fā)現(xiàn)，GGT和TGT單倍體在ET組和對照組中差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。二個多態(tài)性位點的不同基因型的血常規(guī)指標、年齡及JAK2 V617突變情況無明顯區(qū)別。