Tim-3和膽固醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的作用Tim-3基因多態(tài)性與原發(fā)性血小板增多癥相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分:Tim-3在人乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義
　　研究目的:乳腺癌是外部環(huán)境、遺傳背景等多方面聯(lián)合作用導(dǎo)致的后果，深入研究其致病的分子生物機(jī)制，有利于找到更有效治療方法。T細(xì)胞免疫球蛋白及黏蛋白結(jié)構(gòu)域分子-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3，Tim-3)是一種負(fù)性免疫調(diào)節(jié)分子，在腫瘤免疫中發(fā)揮重要的功能。本文旨在觀察Tim-3在人乳腺癌細(xì)

2、胞中的表達(dá)水平及其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　研究方法:通過Western檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞株Tim-3的表達(dá);瓊脂糖凝膠電泳和Western檢測(cè)Tim3-siRNA和ADV-Tim3對(duì)Tim-3的作用效果;利用CCK-8、劃痕、Transwell及Annexin V/FITC，檢測(cè)Tim-3對(duì)乳腺癌細(xì)胞的影響。
　　結(jié)果:Tim-3可表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞上;siRNA阻斷Tim-3的表達(dá)后，乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力減弱，

3、早期凋亡率增加（P＜0.05）;ADV-Tim3上調(diào)Tim-3的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力增強(qiáng)，早期凋亡率降低（P＜0.05）。結(jié)論:Tim-3可表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞上。Tim-3可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力及抑制其早期凋亡，為乳腺癌的防治提供新靶點(diǎn)。
　　第二部分:膽固醇對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的作用及機(jī)制研究
　　研究目的:有研究表明，肥胖和代謝綜合征是威脅乳腺癌發(fā)生發(fā)展的重要因素，高膽固醇血癥能夠?qū)е氯橄侔┑纳L和

4、轉(zhuǎn)移。但是膽固醇引起的乳腺癌細(xì)胞反應(yīng)目前尚未有研究證實(shí)。本試驗(yàn)是在體外細(xì)胞水平上研究兩種濃度的膽固醇(20umol/L和40umol/L)對(duì)乳腺癌細(xì)胞的作用及其作用機(jī)制。
　　研究方法:利用CCK-8、劃痕、Transwell及Annexin V/FITC，檢測(cè)膽固醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡的作用。通過siRNA和ADV-Tim3阻斷和促進(jìn)Tim-3后，觀察膽固醇對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖和侵襲的作用。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相

5、比，膽固醇20umol/L和40umol/L均可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖能力，促進(jìn)遷移和侵襲，抑制早期凋亡(P＜0.05)。通過siRNA和ADV-Tim3阻斷或促進(jìn)Tim-3表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)無論阻斷還是上調(diào)Tim-3的表達(dá)，與對(duì)照組相比，膽固醇都會(huì)抑制細(xì)胞的增殖能力，促進(jìn)細(xì)胞的侵襲能力(P＜0.05)。
　　結(jié)論:膽固醇能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖及早期凋亡、促進(jìn)遷移和侵襲。膽固醇通過Tim-3非依賴途徑抑制乳腺癌的增殖及促進(jìn)其侵襲。

6、>　　第三部分:Tim-3基因多態(tài)性與原發(fā)性血小板增多癥相關(guān)性研究
　　研究目的:T細(xì)胞免疫球蛋白及黏蛋白結(jié)構(gòu)域分子-3(T cell immunoglobulin andmucin-domain containing molecule-3，Tim-3)優(yōu)先表達(dá)于終末分化的Th1細(xì)胞上，與其配體Galectin-9結(jié)合，可以誘導(dǎo)Th1細(xì)胞凋亡，抑制其分泌IFN-γ。有文獻(xiàn)表明，慢性炎癥狀態(tài)與MPNs的發(fā)生有關(guān)。Tim-3作為一個(gè)重

7、要的炎癥調(diào)控因子，可能與原發(fā)性血小板增多癥(essential thrombocythaemia，ET)的發(fā)生有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究Tim-3基因三個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNPs)（-1516G＞T、-574G＞T和+4259T＞G）是否與ET患者的基因易感性有關(guān)。
　　研究方法:我們選取175例ET患者和151健康對(duì)照。利用PCR-RFLP方法分析-1516G＞T、-574G＞T和+4259T＞G三個(gè)位點(diǎn)的基因多態(tài)性。我們還研究了

8、每個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型與ET危險(xiǎn)因素的關(guān)系，包括血常規(guī)指標(biāo)、年齡和JAK2V617基因突變。
　　結(jié)果:ET患者-1516G＞T、-574G＞T和+4259T＞G三個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)的基因型和基因頻率分布與對(duì)照組相比有顯著的區(qū)別(P＜0.05)。單倍體分析發(fā)現(xiàn)，GGT和TGT單倍體在ET組和對(duì)照組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。二個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型的血常規(guī)指標(biāo)、年齡及JAK2 V617突變情況無明顯區(qū)別。