瑞舒伐他汀對(duì)血管性癡呆大鼠海馬凋亡與自噬的作用.pdf

1、目的:
　　血管性癡呆(vascular dementia，VD)是最常見(jiàn)的非變性病癡呆，由各種腦血管疾病誘發(fā)，占癡呆總數(shù)15％-20％，僅次于阿爾茨海默病(Alzheimer'sDisease，AD)。慢性腦低灌注(Chronic cerebral hypoperfusion，CCH)被認(rèn)為是腦血管病患者出現(xiàn)癡呆的顯著危險(xiǎn)因素，可導(dǎo)致腦關(guān)鍵部位（尤其是海馬CA1區(qū)）缺血缺氧，誘發(fā)遲發(fā)性神經(jīng)元損害，進(jìn)而導(dǎo)致癡呆。因此，探討CCH的

2、病理生理變化有助于發(fā)現(xiàn)VD潛在的治療靶點(diǎn)。在該病理變化中腦神經(jīng)元大量丟失，凋亡與自噬共存并相互作用。凋亡是細(xì)胞的一種主動(dòng)性死亡方式，Bcl-2家族凋亡蛋白中Bcl-2蛋白具有抗凋亡作用，而B(niǎo)ax具有促凋亡作用，主要依賴于Bcl-2/Bax比值的變化對(duì)凋亡進(jìn)行調(diào)控。自噬是細(xì)胞自我吞噬的過(guò)程，CCH中腦組織的自噬水平處于激活狀態(tài)，長(zhǎng)期過(guò)度自噬可損害神經(jīng)元，Beclin-1蛋白是目前常用的自噬發(fā)生的生物學(xué)指標(biāo)。
　　他汀類藥物作為卒中后

3、一級(jí)預(yù)防藥物，它不僅具有降脂、抑制血小板聚集、穩(wěn)定斑塊等作用，還具有抑制凋亡、抗氧化應(yīng)激、抗炎、調(diào)節(jié)自噬等作用。不同類型的他汀在不同組織中對(duì)自噬的調(diào)節(jié)作用不同。瑞舒伐他汀(rosuvastatin，ROS)目前在臨床上被廣泛應(yīng)用，有研究發(fā)現(xiàn)ROS可以改善VD大鼠行為學(xué)能力，但其神經(jīng)保護(hù)機(jī)制仍未明確，該機(jī)制是否與ROS對(duì)慢性腦缺血中神經(jīng)元自噬與凋亡水平的調(diào)節(jié)有關(guān)，目前尚無(wú)實(shí)驗(yàn)證實(shí)。
　　本研究旨在通過(guò)檢測(cè)ROS對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)及記憶能

4、力、海馬組織形態(tài)學(xué)及凋亡與自噬水平的作用，探討ROS對(duì)VD的保護(hù)作用及其病理機(jī)制，為臨床優(yōu)化用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　選取SPF級(jí)雄性SD大鼠，11-12周齡，體重250-270g，隨機(jī)分為4組，分別為:1.假手術(shù)+生理鹽水組（Sham組）;2.假手術(shù)+瑞舒伐他汀組（Sham+ROS組）;3.VD+生理鹽水組（VD組）;4.VD+瑞舒伐他汀組（VD+ROS組）。VD模型采用雙側(cè)永久性頸總動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)構(gòu)建。每組大鼠術(shù)后

5、2周開(kāi)始給予相應(yīng)試劑處理，瑞舒伐他汀按5mg/kg/d灌胃（按AUC推算，全身暴露量相當(dāng)于人40mg/d暴露量），生理鹽水按等體積灌胃，每天1次，連續(xù)用藥3周。給藥結(jié)束后進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察各組大鼠的行為學(xué)改變，隨后取材進(jìn)行HE染色觀察大鼠海馬CA1區(qū)形態(tài)學(xué)改變，免疫組化法觀察Beclin-1及Bcl-2蛋白在CA1區(qū)的表達(dá)變化，以及Western Blotting免疫印跡法觀察海馬組織Bcl-2/Bax比值變化。
　　

6、結(jié)果:
　　1.ROS對(duì)VD大鼠行為學(xué)的作用
　　各組大鼠逃避潛伏期以及目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。Sham組與Sham+ROS組行為學(xué)無(wú)顯著差異(P＞0.01)。與前兩組相比，VD組逃避潛伏期增加，目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比降低(P＜0.01)。VD+ROS組較VD組逃避潛伏期縮短，目標(biāo)象限停留時(shí)間百分比增加(P＜0.01)。
　　2.ROS對(duì)VD大鼠海馬CA1區(qū)組織形態(tài)學(xué)的作用
　　Sh

7、am組及Sham+ROS組中，兩組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、排列整齊，無(wú)明顯神經(jīng)元丟失。VD組與前兩組相比，大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)不規(guī)則、排列疏松，胞核固縮深染、核仁消失，存在明顯神經(jīng)元丟失。VD+ROS組與VD組相比，上述病理學(xué)改變有明顯改善。
　　3.ROS對(duì)VD大鼠海馬組織Bcl-2/Bax蛋白比值的作用
　　各組大鼠海馬組織Bcl-2/Bax比值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.003)，Sham組與Sham+ROS組

8、海馬Bcl-2/Bax比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.966)，與前兩組比較，VD組海馬Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.01)，VD+ROS組較VD組Bcl-2/Bax比值升高(P=0.026)。
　　4.ROS對(duì)VD大鼠海馬CA1區(qū)Bcl-2和Beclin-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的作用
　　Sham組與Sham+ROS組大鼠海馬CA1區(qū)可見(jiàn)少量Bcl-2和Beclin-1陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.01)。VD組Bcl

9、-2和Beclin-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較前兩組增加(P＜0.05)。與VD組相比，VD+ROS組Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞增加，而B(niǎo)eclin-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎形成慢性腦低灌注可制備VD大鼠模型，導(dǎo)致大鼠行為學(xué)能力降低，瑞舒伐他汀可在一定程度上緩解大鼠的空間學(xué)習(xí)及記憶障礙;
　　2.慢性腦低灌注可引起海馬CA1區(qū)神經(jīng)元發(fā)生明顯的病理改變，瑞舒伐他汀治療可一定程度上減輕神經(jīng)