烏梅噴霧劑對(duì)Wistar大鼠頜下腺放射性損傷后功能影響的研究.pdf

1、目的
　　建立放射頜下腺損傷的動(dòng)物模型，使用烏梅噴霧劑干預(yù)后測(cè)定其唾液流率、唾液成分以及摘取大鼠腺體，用HE染色、PCR等技術(shù)方法檢測(cè)唾液腺及唾液細(xì)胞形態(tài)和功能的變化、水通道因子AQP1和AQP5基因的表達(dá)，從分子病理層面探究放射性頜下腺損傷的發(fā)病機(jī)制以及烏梅噴霧對(duì)放射頜下腺損傷的修復(fù)效果及作用機(jī)制。
　　方法
　　實(shí)驗(yàn)一方法:大鼠由廣州中醫(yī)藥大學(xué)（大學(xué)城）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心統(tǒng)一提供，SCXK（粵）2013-0034，Wis

2、tar種類(lèi)，6～7周，180～220g，共115只，SYXK（粵）2013-0085，并通過(guò)大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)批復(fù)同意。將115只大鼠隨機(jī)分為正常組(sham-irradiated control group，SIG)、模型組(irradiated group，IG)，正常組(n=56)只麻醉不照射，模型組(n=59)麻醉后使用直線(xiàn)加速器一次性照射18Gy（射線(xiàn)類(lèi)型:電子線(xiàn)，能量為9MV，劑量率為3Gy/min），將大鼠頜下腺部位暴露于

3、照射區(qū)(暴露區(qū)域:1.5cm*1.5cm)，其他部位由2cm鉛板遮檔，避免受到射線(xiàn)影響。照射結(jié)束后，兩組分8個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察大鼠飲食量、唾液流率等指標(biāo)，即第1天、第3天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天，期間不限制飲食量，每組各個(gè)時(shí)間段取7～8只大鼠解剖摘取頜下腺組織做病理組織學(xué)檢查。通過(guò)對(duì)正常組和模型組大鼠飲水量、唾液量、病理組織學(xué)方法、水通道蛋白的表達(dá)觀察判斷大鼠放射性頜下腺損傷的模型建立與否。
　　實(shí)驗(yàn)二

4、方法:通過(guò)隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，將175只Wistar大鼠隨機(jī)分成5組，每組35只大鼠，分別為正常組(sham-irradiated control group，SIG)、模型組(irradiatedgroup，IG)、生理鹽水組(normal saline group，NSG)、匹羅卡品組(pilocarpinegroup，PG)、烏梅噴霧組(dark plum spray group，DPSG)。正常組只麻醉不照射，其他4組麻醉后使用直線(xiàn)加

5、速器一次性照射18Gy（具體照射方法同實(shí)驗(yàn)一）。造模后，各組分5個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集唾液、摘取頜下腺腺體，即第1天、第3天、第7天、第14天、第28天，期間不限制飲食量，每組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)取7只大鼠取樣測(cè)定唾液流率、唾液成分以及摘取大鼠腺體，用HE染色、PCR等技術(shù)方法檢測(cè)唾液腺組織形態(tài)和功能的變化以及水通道蛋白AQP1和AQP5基因的表達(dá)量。
　　結(jié)果
　　實(shí)驗(yàn)一結(jié)果:放射后1～21天模型組大鼠飲水量為(6.42±1.91) ml、正

6、常組飲水量為(4.82±1.20)ml，模型組飲水量明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01);在放射后第1天、第3天、第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天模型組唾液量均低于正常組，其中第7天、第21天、第28天、第42天的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05);第1天、第21天、第28天、第35天、第42天頜下腺指數(shù)比較有顯著差異(P＜0.05);HE病理切片顯示頜下腺腺體明顯萎縮，腺體細(xì)胞核固縮明顯，體積明顯變

7、小，間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重，間質(zhì)明顯增寬，間質(zhì)中膠原有些增生，間質(zhì)中血管充血明顯，病理?yè)p傷程度呈漸進(jìn)性加重，放射后42天損傷最為嚴(yán)重;頜下腺組織通PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示模型組1～42天的水通道蛋白AQP1和AQP5的表達(dá)明顯受到抑制（P＜0.05）。
　　實(shí)驗(yàn)二結(jié)果:第7天、28天的模型組唾液流率明顯低于正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且第7天烏梅噴霧組唾液流率高于正常組和模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;生理鹽

8、水組、匹羅卡品組和烏梅噴霧組對(duì)放射后唾液成分的改變無(wú)明顯改變;HE染色結(jié)果也顯示烏梅噴霧組與匹羅卡品組頜下腺組織的修復(fù)情況較好，在第14、28天結(jié)果中，烏梅噴霧組的腺體得到修復(fù)，腺體組織恢復(fù)情況幾乎接近于正常組;匹羅卡品組和烏梅噴霧組能促進(jìn)水通道AQP1和AQP5的基因表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，烏梅噴霧劑干預(yù)兩周后，烏梅噴霧組的促進(jìn)水通道AQP1和AQP5表達(dá)的作用更為顯著。
　　結(jié)論
　　Wistar大鼠接受

9、直線(xiàn)加速器電子線(xiàn)18Gy照射后，放射性頜下腺損傷的動(dòng)物模型成功建立，損傷機(jī)制為放射在損傷頜下腺組織細(xì)胞的同時(shí)，位于頜下腺的水通道因子AQP1和AQP5的表達(dá)也受到抑制，由于水通道蛋白AQP1和AQP5是頜下腺調(diào)控水分泌和水跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)的主要通道，因此水分泌和水跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)功能受到不良影響，進(jìn)而唾液分泌減少以及頜下腺損傷進(jìn)一步加重。烏梅噴霧劑干預(yù)2周后，能促進(jìn)大鼠頜下腺水通道因子AQP1和AQP5基因的高表達(dá)，從而促進(jìn)水跨膜運(yùn)轉(zhuǎn)，促使頜下腺組織的