烏梅噴霧劑促進唾液腺細胞自噬防治放射性口干癥的機制研究.pdf

1、目的:
　　本研究擬通過放射性唾液腺損傷大鼠模型，觀察烏梅噴霧劑對放射性唾液腺損傷大鼠體重、唾液分泌功能的影響，分析活體組織的病理形態(tài)，研究烏梅噴霧劑對頜下腺腺泡細胞和對腺泡細胞自噬相關(guān)基因及蛋白表達的影響，探討烏梅噴霧劑對放射性損傷后唾液腺功能、結(jié)構(gòu)、分子機制的影響，為臨床應(yīng)用開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　經(jīng)動物倫理委員會同意選取140只健康SPF級雄性6～7周Wistar大鼠，體重約170～210g。隨機分為對照

2、組、模型組、陰性對照組、陽性對照組、實驗組，每組28只。單一劑量18Gy頜下腺區(qū)照射,建立放射性唾液腺損傷大鼠模型，以生理鹽水噴霧劑為陰性對照，以匹羅卡品噴霧劑為陽性對照，烏梅噴霧劑為實驗組，于照射后每天三次口腔噴霧干預(yù)處理，對照組正常喂養(yǎng)外不作干預(yù)，模型組照射后正常喂養(yǎng)外不作干預(yù)。于照射后第1、7、14、28天，每天每組取7只，記錄大鼠體重，探討烏梅噴霧劑對放射性唾液腺損傷大鼠體重的影響;收集大鼠唾液，檢測烏梅噴霧劑對放射性唾液腺損傷

3、大鼠唾液分泌的影響;摘取頜下腺，采用組織切片蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡觀察頜下腺組織病理變化;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)技術(shù)檢測自噬相關(guān)因子Beclin-1、Atg5的mRNA及蛋白表達水平，從分子生物學水平檢測細胞自噬水平的變化。
　　結(jié)果:
　　(1)照射后第7、14、28天，對照組體重差增加明顯高于其余四組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);照射后第14、2

4、8天，實驗組體重差高于模型組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但與陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。(2)照射后第1天，各照射組唾液流率均低于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義;照射后第7天，實驗組與對照組、陽性對照組間差異無統(tǒng)計學意義，模型組與對照組、陽性對照組、實驗組間唾液流率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(3) HE染色結(jié)果顯示，照射后第1天，實驗組、模型組、陰性對照組、陽性對照組大鼠腺體均出現(xiàn)輕微的萎縮，腺體細胞

5、體積有些變小，部分發(fā)生壞死，核固縮明顯，間質(zhì)中可見明顯的炎性細胞浸潤，腺體間隔輕微的增寬等的病理改變;照射后第7、14天，實驗組、陽性對照組與模型組相比，腺體細胞病理形態(tài)有所修復(fù);照射后第28天，模型組與陰性對照組腺體存在較為嚴重的損傷，而實驗組腺體排列規(guī)則，腺體未見萎縮，少量腺體細胞核發(fā)生固縮，腺體細胞未見明顯壞死，間質(zhì)中未見炎性細胞浸潤，間質(zhì)未見增寬，損傷腺體能明顯修復(fù)了其細胞形態(tài)。(4)自噬相關(guān)基因Beclin1和Atg5在各組中

6、均有表達;照射后第1、7、14天，實驗組、模型組、陽性對照組的Beclin1基因相對表達量高于對照組，實驗組與模型組的Beclin1基因相對表達量間差異無統(tǒng)計學意義;照射后第1、7天，實驗組、模型組、陰性對照組、陽性對照組的Atg5基因相對表達量高于對照組，且具有顯著性差異。(5)照射后第1、7天，實驗組、模型組、陽性對照組的Beclin1蛋白表達比對照組高;照射后第1、7、14天，實驗組、模型組、陰性對照組、陽性對照組的Atg5蛋白表