烏梅噴霧劑促進(jìn)唾液腺細(xì)胞自噬防治放射性口干癥的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　本研究擬通過放射性唾液腺損傷大鼠模型，觀察烏梅噴霧劑對(duì)放射性唾液腺損傷大鼠體重、唾液分泌功能的影響，分析活體組織的病理形態(tài)，研究烏梅噴霧劑對(duì)頜下腺腺泡細(xì)胞和對(duì)腺泡細(xì)胞自噬相關(guān)基因及蛋白表達(dá)的影響，探討烏梅噴霧劑對(duì)放射性損傷后唾液腺功能、結(jié)構(gòu)、分子機(jī)制的影響，為臨床應(yīng)用開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)同意選取140只健康SPF級(jí)雄性6～7周Wistar大鼠，體重約170～210g。隨機(jī)分為對(duì)照

2、組、模型組、陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，每組28只。單一劑量18Gy頜下腺區(qū)照射,建立放射性唾液腺損傷大鼠模型，以生理鹽水噴霧劑為陰性對(duì)照，以匹羅卡品噴霧劑為陽(yáng)性對(duì)照，烏梅噴霧劑為實(shí)驗(yàn)組，于照射后每天三次口腔噴霧干預(yù)處理，對(duì)照組正常喂養(yǎng)外不作干預(yù)，模型組照射后正常喂養(yǎng)外不作干預(yù)。于照射后第1、7、14、28天，每天每組取7只，記錄大鼠體重，探討烏梅噴霧劑對(duì)放射性唾液腺損傷大鼠體重的影響;收集大鼠唾液，檢測(cè)烏梅噴霧劑對(duì)放射性唾液腺損傷

3、大鼠唾液分泌的影響;摘取頜下腺，采用組織切片蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡觀察頜下腺組織病理變化;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)技術(shù)檢測(cè)自噬相關(guān)因子Beclin-1、Atg5的mRNA及蛋白表達(dá)水平，從分子生物學(xué)水平檢測(cè)細(xì)胞自噬水平的變化。
　　結(jié)果:
　　(1)照射后第7、14、28天，對(duì)照組體重差增加明顯高于其余四組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);照射后第14、2

4、8天，實(shí)驗(yàn)組體重差高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但與陽(yáng)性對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2)照射后第1天，各照射組唾液流率均低于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;照射后第7天，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組與對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組間唾液流率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3) HE染色結(jié)果顯示，照射后第1天，實(shí)驗(yàn)組、模型組、陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組大鼠腺體均出現(xiàn)輕微的萎縮，腺體細(xì)胞

5、體積有些變小，部分發(fā)生壞死，核固縮明顯，間質(zhì)中可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體間隔輕微的增寬等的病理改變;照射后第7、14天，實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組與模型組相比，腺體細(xì)胞病理形態(tài)有所修復(fù);照射后第28天，模型組與陰性對(duì)照組腺體存在較為嚴(yán)重的損傷，而實(shí)驗(yàn)組腺體排列規(guī)則，腺體未見萎縮，少量腺體細(xì)胞核發(fā)生固縮，腺體細(xì)胞未見明顯壞死，間質(zhì)中未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)未見增寬，損傷腺體能明顯修復(fù)了其細(xì)胞形態(tài)。(4)自噬相關(guān)基因Beclin1和Atg5在各組中

6、均有表達(dá);照射后第1、7、14天，實(shí)驗(yàn)組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組的Beclin1基因相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組與模型組的Beclin1基因相對(duì)表達(dá)量間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;照射后第1、7天，實(shí)驗(yàn)組、模型組、陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組的Atg5基因相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)照組，且具有顯著性差異。(5)照射后第1、7天，實(shí)驗(yàn)組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組的Beclin1蛋白表達(dá)比對(duì)照組高;照射后第1、7、14天，實(shí)驗(yàn)組、模型組、陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組的Atg5蛋白表