RGS2基因多態(tài)性及其蛋白聯(lián)合和肽素、AngⅡ-AT1R與子癇前期的相關(guān)研究.pdf

1、1.研究背景:
　　子癇前期(pre-eclampsia PE)是妊娠期特有疾病，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一。有關(guān)PE病因的假說很多，但具體機制還未被完全闡明，如何預(yù)防和治療PE是產(chǎn)科醫(yī)生面臨的難題。單核苷酸多態(tài)性(SNP)與PE的關(guān)系存在地域和種族的差異。目前已知RGS2基因(The regulator of G protein signaling2 gene)可以對部分血管收縮劑進行負性調(diào)節(jié)，從而降低血壓。血管緊張素Ⅱ(a

2、ngiotensinⅡ，AngⅡ)和精氨酸加壓素(AVP)作為縮血管活性物質(zhì)，前者與G蛋白偶聯(lián)受體血管緊張素Ⅰ型受體(angiotensin type1 receptor，ATIR)結(jié)合后對血壓進行調(diào)節(jié)。而RGS2對血壓的負性調(diào)節(jié)作用可能是通過減弱G蛋白介導(dǎo)的AngⅡ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)來實現(xiàn)的。和肽素(copeptin，CPT)是含有39個氨基酸的糖肽，是AVP生成與釋放時的附帶產(chǎn)品，兩者主要由AVP前體分泌，等摩爾釋放，被認為是很好的AVP替代

3、品。CPT性質(zhì)穩(wěn)定，目前已經(jīng)用于許多疾病的研究。
　　2.研究目的和意義:
　　本文目的是對RGS2基因部分位點和腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的SNP進行檢測，以期發(fā)現(xiàn)其與中國漢族人群PE的相關(guān)性;同時，探討血漿中RGS2蛋白、和肽素、AVP、AngⅡ、AT1R、sFlt-1各物質(zhì)在PE發(fā)病中的作用;為PE的預(yù)測和治療提供幫助。從而降低PE的發(fā)病率，減少孕產(chǎn)婦及新生兒的死亡率。
　　3.研究方法:
　　3.1.收

4、集2015年3月-2016年9月在深圳市婦幼保健院住院分娩的PE患者132例為病例組(PE組)，選擇同期妊娠分娩的正常妊娠孕婦158例為對照組(NT組)，采用SNaPshot技術(shù)對兩組間的母體外周血進行基因測序。分析兩組間臨床資料的差異，用累積模型(Additive)、顯性模型(Dominant)及隱性模型(Recessive)對各位點的不同基因型與PE的相關(guān)性進行比較。
　　3.2.選50例PE患者為PE組（分合并FGR組17例

5、，非FGR組33例兩個亞組），選40例健康孕婦為NT組，采用ELISA法檢測各組血漿RGS2蛋白、AngⅡ及AT1R濃度，比較其差異。
　　3.3.選出39例PE組患者為病例組（分E-PE組12例，L-PE組27例），新增11例妊娠期高血壓患者為HT組，另選與L-PE組、E-PE孕齡相符的對照組60例（L-NT組40例，E-NT組20例），采用ELISA法檢測各組孕婦血清中和肽素、sFlt-1、AVP水平差異，了解其與疾病嚴重程度

6、的關(guān)系。
　　4.結(jié)果:
　　4.1.RGS2基因8個位點及部分RAS中4個位點的snps在PE組與NT組間的比較
　　4.1.1.與年齡＜35歲的孕婦相比，年齡≥35歲的高齡妊娠婦女發(fā)生子癇前期的OR=3.88，95％CI=(1.49-10.11)，P=0.006，調(diào)整BMI后的OR=3.54，95％CI=(1.32-9.55)，P=0.012，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與BMI＜24的孕婦相比，24≤BMI＜27的孕婦發(fā)生

7、PE的OR=2.28，95％CI=(1.23-4.25)，P=0.009，調(diào)整年齡后的OR=1.97,95％CI=(1.03-3.75)，P=0.039，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;當BMI≥27時，發(fā)生PE的風險為OR=3.68,95％CI=(1.12-12.10)，P=0.032，調(diào)整年齡后的OR=3.85,95％CI=(1.15-12.89)，P=0.029，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.1.2.PE組RGS2基因rs4606位點CG和

8、GG基因型頻率分別為41.7％、25.0％高于對照組38.2％、15.1％，而CC基因型頻率為33.3％低于對照組46.7％,P=0.033;PE組G等位基因頻率45.8％高于對照組34.2％,P=0.005。OR值在Additive中(GG VS CC:OR=2.32,95％CI=1.21-4.44,P=0.012);在dominant中(CG+GG VSCC:OR=1.75,95％CI=1.10-2.84,P=0.022);在rec

9、essive中(GG VSCC+CG:OR=1.87,95％CI=1.03-3.38,P=0.039)。
　　4.1.3.PE組RGS2基因rs10607564位點ID和Ⅱ基因型頻率(56.2％、23.5％)顯著高于NT組(41.2％、17.0％)，而DD基因型頻率為20.5％低于NT組41.8％，P=0.001; PE組Ⅰ等位基因頻率51.5％高于對照組37.6％，P=0.001。在累積模型中(ID VS DD:OR=2.70,

10、95％CI=1.54-4.73,P=0.001;Ⅱ VSDD:OR=2.69,95％CI=1.35-5.38, P=0.005;);在顯性模型中(ID+Ⅱ VSDD:OR=2.80,95％CI=1.64-4.76,P=0.0001)。
　　4.1.4.PE組RGS2基因的rs1764363、rs16834589、rs2746071、rs12130714三個位點RAS中的rs4646994、rs699、rs5186位點的基因型頻率及

11、等位基因頻率與NT組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)
　　4.2.RGS2蛋白、AngⅡ及AT1R在PE組及對照組間的差異比較
　　4.2.1.PE組血清中RGS2、AngⅡ及AT1R水平均高于對照組，P＜0.05;合并FGR組、非FGR組兩組間的RGS2蛋白差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但都高于對照組(P＜0.05);AngⅡ及AT1R濃度在對照組、非FGR組及合并FGR組中逐漸升高(P＜0.05)
　　4.2

12、.2.RGS2、AngⅡ及AT1R三種指標粗OR值分別為RGS2(OR=1.002;95％CI:1.001-1.002,P＜0.05),AngⅡ(OR=1.010;95％CI:1.005-1.016,P＜0.05),AT1R(OR=1.002，95％CI:1.001-1.003，P＜0.05).控制抽樣孕周后的OR值分別1.002、1.011、1.002，三者P＜0.05;控制另外兩種指標后，調(diào)整后的OR值分別為1.001、1.001（

13、0.993-1.009，P=0.852）、1.002，其中AngⅡ差異無統(tǒng)計學(xué)意義
　　4.2.3.RGS2、AngⅡ及AT1R三者與PE的發(fā)生呈正性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)(r)分別為:0.440、0.407、0.524，與SBP的r值分別為0.417、0.406、0.536，P＜0.05，與DBP的r值分別為0.355、0.349、0.456(P＜0.05)，與胎兒體重的r值分別是-0.134、-0.439、-0.562，其中RGS2蛋

14、白與胎兒體重r值無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.228)
　　4.3.CPT、sFlt-1及AVP水平與PE的相關(guān)性分析結(jié)果
　　4.3.1.HT組、E-PE組及L-PE組血清中CPT、sFlt-1、AVP水平均高于L-NT組(P均＜0.05); E-PE組血清中CPT、sFlt-1、AVP水平高于E-NT組;
　　4.3.2.CPT與sFlt-1、AVP、年齡、SBP、DBP均呈正相關(guān)（r分別為0.064、0.330、0.00

15、1、0.346、0.673、0.622，P均＜0.01），而與胎兒體質(zhì)量和發(fā)病孕周呈負相關(guān)（r分別為-0.423、-0.375，P均＜0.01）。
　　5.結(jié)論:
　　5.1.年齡大于35歲是導(dǎo)致PE發(fā)生的高危因素，超過35歲孕婦發(fā)生PE的風險是35歲以內(nèi)孕婦的3.54倍，95％CI=(1.32-9.55)。
　　5.2.妊娠期女性PE的發(fā)病風險會隨BMI值的增加而增加，24≤BMI＜27的超重孕婦發(fā)生PE的風險是BM

16、I＜24孕婦的1.97倍，95％CI=(1.03-3.75) BMI≥27的肥胖孕婦發(fā)生PE的風險是BMI＜24孕婦的3.85倍，95％CI=（1.15-12.89）。
　　5.3.RGS2基因的rs4606及rs10607546可能與PE的易感性相關(guān);rs4606位點的G等位基因及rs10607546的I等位基因可能是PE的易感等位基因;其中攜帶rs4606位點CG或GG基因型及rs10607546位點的ID和Ⅱ基因型的女性患P