二甲雙胍通過P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主動脈平滑肌細胞的增殖和遷移.pdf

1、目的：平滑肌細胞的增殖和遷移對于血管動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展以及斑塊的破裂具有重要意義。二甲雙胍作為一種廣泛應用于臨床的降糖藥，據(jù)報道它能夠抑制細胞的增殖和遷移。本文通過體外實驗探尋二甲雙胍對原代人主動脈平滑肌細胞增殖和遷移的影響，并闡明其分子機制。
　　方法:選取2組不同代數(shù)的原代人主動脈平滑肌細胞（第三代和第七代），通過β半乳糖苷酶染色、細胞計數(shù)、CCK-8、細胞周期和細胞Transwell檢測這兩組不同代數(shù)細胞的衰老、增殖和

2、遷移能力；通過western blot檢測這兩組細胞中P53、IFI16、AMPK和P-AMPK的蛋白表達水平；通過細胞免疫熒光檢測這兩組細胞中P53和IFI16的內(nèi)源性表達水平。分別用不同濃度的二甲雙胍（0,2,5,10 mmol/l）刺激第三代的平滑肌細胞24小時，通過RT-PCR檢測四組細胞中P53和IFI16的mRNA水平，通過western blot檢測四組細胞中P53、P-P53(Ser-15)、IFI16、AMPK和P-A

3、MPK的蛋白表達水平；并通過細胞計數(shù)、CCK-8、細胞周期和細胞Transwell檢測這四組細胞的增殖和遷移能力。取第三代平滑肌細胞分別轉(zhuǎn)染陰性對照小干擾RNA（control siRNA）和P53小干擾RNA(P53 siRNA),設未處理組（Untreated group）,陰性對照組（Control siRNA group）和P53小干擾組（P53 siRNA group），通過RT-PCR和western blot檢測P53，I

4、FI16和AMPK的表達水平；在P53小干擾RNA轉(zhuǎn)染后的細胞中加入二甲雙胍（10mmol/l）刺激24小時，通過細胞計數(shù)、CCK-8、細胞周期和細胞Transwell再次評估二甲雙胍對P53干擾后平滑肌細胞增殖和遷移的影響。同樣取第三代平滑肌細胞分別轉(zhuǎn)染陰性對照小干擾RNA（control siRNA）和IFI16小干擾RNA(IFI16 siRNA),設未處理組（Untreated group）,陰性對照組（Control siRN

5、A group）和IFI16小干擾組（IFI16 siRNA group），通過RT-PCR和western blot檢測P53，IFI16和AMPK的表達水平；在IFI16小干擾RNA轉(zhuǎn)染后的細胞中加入二甲雙胍（10 mmol/l）刺激24小時，通過細胞計數(shù)、CCK-8、細胞周期和細胞Transwell再次評估二甲雙胍對IFI16干擾后平滑肌細胞增殖和遷移的影響。在分別轉(zhuǎn)染P53小干擾RNA和IFI16小干擾RNA的細胞中加入二甲雙胍

6、（10 mmol/l）刺激24小時，通過western blot檢測P53，P-P53(Ser-15)，IFI16，AMPK和P-AMPK的表達水平。
　　結果：衰老的平滑肌細胞（第七代）呈現(xiàn)增殖和遷移能力的減弱，其中P53，IFI16，AMPK和P-AMPK的蛋白表達水平明顯增加。二甲雙胍通過激活P53，IFI16和AMPK的表達抑制平滑肌細胞的增殖和遷移。P53和IFI16干擾后能引起AMPK表達的降低，同時能明顯地