Egr-1及AQP9在As2O3協(xié)同AZT促肝癌細胞凋亡中的表達及作用研究.pdf

1、目的：探究在三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）聯(lián)合疊氮胸苷（3’-azido-3’-deoxythymidine，AZT）促肝癌細胞凋亡過程中Egr-1的作用及水通道蛋白9（Aquaporin9，AQP9）的表達，并對其可能的作用機制進行初步探究，為兩藥的聯(lián)合用藥方案提供更充分的理論依據(jù)。
　　方法：傳代培養(yǎng)人肝癌HepG2細胞，采用電轉(zhuǎn)染法瞬時轉(zhuǎn)染Egr-1 siRNA，細胞轉(zhuǎn)染24h后用藥干預。實驗分為

2、Mock組（空白對照組）、NC組（非特異性對照組，轉(zhuǎn)染非特異序列）和Egr-1 siRNA組（轉(zhuǎn)染Egr-1 siRNA）。各組細胞經(jīng)As2 O3聯(lián)合AZT（終濃度為2和20μmol/L）干預后，實時熒光定量PCR（q-PCR）法分別檢測Egr-1siRNA轉(zhuǎn)染效率以及Egr-1、Caspase3、p53基因的表達水平；蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測Egr-1、Caspase3、p53的蛋白表達水平。
　　傳代培養(yǎng)人

3、肝癌HepG2和MHCC97 H細胞系，以未經(jīng)藥物處理的HepG2和MHCC97 H細胞為空白對照，用MTT法檢測As2O3（2μmol/L）聯(lián)合不同濃度AZT（0、10、20μmol/L）作用48h后，兩株細胞的增殖抑制率（Inhibition rate,IR）；q-PCR法與Western blot法檢測用藥后兩株細胞中AQP9的mRNA及其蛋白表達水平。
　　結(jié)果：電轉(zhuǎn)染Egr-1 siRNA轉(zhuǎn)染效率可達75％以上；q-PC

4、R結(jié)果表明目的Egr-1 siRNA組細胞與Mock組和NC組相比，2μmol/L As2O3聯(lián)合20μmol/L AZT干預后Egr-1、Caspase3、p53的表達量明顯下調(diào)（P＜0.05），而藥物作用后非NC組和Mock組相比，各基因的表達差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；WB實驗檢測各基因蛋白水平的變化得到一致的結(jié)果。
　　2μmol/L As2O3聯(lián)合20μmol/L AZT干預后，HepG2和MHCC97H細胞的增殖

5、抑制率高于空白對照組（P＜0.05）。聯(lián)合用藥組（2μmol/L As2O3+20μmol/LAZT）AQP9的mRNA和蛋白的表達量明顯高于As2O3組和空白對照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）Egr-1可能是通過上調(diào)p53及Caspase3的表達在As2O3聯(lián)合AZT促肝癌細胞HepG2細胞凋亡中發(fā)揮作用的。
　?。?）AZT可能通過增加AQP9的表達促進HepG2及MHCC97H細胞對As2O3的攝入