李果實(shí)蘋(píng)果酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的克隆表達(dá)及其有機(jī)酸的關(guān)聯(lián)性分析.pdf

1、有機(jī)酸是決定果實(shí)品質(zhì)的重要因子，參與了果實(shí)風(fēng)味、色澤、香氣的形成，在果實(shí)中的組成、轉(zhuǎn)運(yùn)與積累機(jī)理是果實(shí)品質(zhì)研究的重要課題。果實(shí)細(xì)胞中，蘋(píng)果酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 tDT（ tonoplast dicarboxylate transporter）和蘋(píng)果酸跨膜離子通道蛋白 ALMT（almuminum-activated malate transporter）基因家族介導(dǎo)胞質(zhì)中蘋(píng)果酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，對(duì)果實(shí)有機(jī)酸積累與降解機(jī)理研究具有重要意義。本研究通過(guò)‘皇冠

2、李’、‘西瓜李’、‘黑琥珀’和‘葡萄李’等四個(gè)代表性品種，應(yīng)用超高效液相色譜（UPLC）進(jìn)行果實(shí)有機(jī)酸組分與含量的分析；通過(guò)同源克隆了一個(gè)液泡膜蘋(píng)果酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白tDT-like基因和兩個(gè)蘋(píng)果酸轉(zhuǎn)運(yùn)離子通道ALMT4-like、ALMT9-like基因，并應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)tDT-like、ALMT4-like和 ALMT9-like基因在4個(gè)代表性品種中的5個(gè)發(fā)育階段的基因表達(dá)水平，并通過(guò) pearson相關(guān)分析和回歸建模系統(tǒng)

3、地分析了李果實(shí)細(xì)胞蘋(píng)果酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)基因與各有機(jī)酸組分的關(guān)聯(lián)性，主要研究結(jié)果如下：
　　1.李果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中pH變化呈V型變化，TA呈倒V型變化。黑琥珀、皇冠李、西瓜李的pH變化V型趨勢(shì)明顯，葡萄李變化較小。pH值大小順序?yàn)椋撼墒炱冢咸牙睿竞阽辍治鞴侠睿净使诶?，完熟期，葡萄李＞黑琥珀＞皇冠李≈西瓜李；TA變化與pH相似，黑琥珀、皇冠李、西瓜李的T倒V趨勢(shì)明顯，葡萄李變化較小，成熟期和完熟期果實(shí)的總酸大小順序?yàn)椋何鞴侠睿净使诶睿?/p>

4、黑琥珀＞葡萄李。高酸和低酸品種的差異主要表現(xiàn)為低酸品種酸降較快或時(shí)間較長(zhǎng)，反之則酸降較慢或時(shí)間較短。
　　2.蘋(píng)果酸是李果實(shí)中主要的有機(jī)酸，占總酸含量的57％~84%，李屬于典型的蘋(píng)果酸型果實(shí)；其次是酒石酸，個(gè)別品種（如西瓜李）高達(dá)18%~36%；而果實(shí)中的檸檬酸、琥珀酸、草酸、乙酸、富馬酸只以少量或微量存在。4個(gè)測(cè)試品成熟期果實(shí)蘋(píng)果酸含量順序?yàn)椋夯使诶睿疚鞴侠睢趾阽辏酒咸牙睢?br>　　3.蘋(píng)果酸轉(zhuǎn)運(yùn)體基因?qū)Σ煌贩N果實(shí)蘋(píng)果酸

5、的調(diào)控作用有所差異。tDT-like基因?qū)Ω咛O(píng)果酸含量品種（如皇冠李、西瓜李）果實(shí)酸的積累起到一定程度的正向調(diào)控作用，對(duì)低蘋(píng)果酸含量品種（如葡萄李）的調(diào)控作用不明顯。ALMT9-like基因?qū)Σ煌贩N李果實(shí)蘋(píng)果酸的積累均表現(xiàn)為負(fù)向調(diào)控作用。ALMT4-like基因?qū)使诶?、西瓜李、葡萄李的蘋(píng)果酸積累起到起促進(jìn)作用，但對(duì)黑琥珀的蘋(píng)果酸積累起到負(fù)向調(diào)控作用。
　　4.蘋(píng)果酸轉(zhuǎn)運(yùn)體與有機(jī)酸組分的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果顯示，ALMT4-like基