雙酚A和染料木黃酮對(duì)大鼠糖脂代謝的影響.pdf

1、目的：（1）觀察BPA和染料木黃酮干預(yù)對(duì)成年雄性Wistar大鼠糖脂代謝的影響。（2）探索BPA暴露導(dǎo)致血葡萄糖平衡紊亂的可能機(jī)制；觀察父代大鼠長(zhǎng)期“安全劑量”BPA暴露對(duì)子代大鼠出生結(jié)局及子代大鼠成年后糖脂代謝的影響。（3）探索BPA和染料木黃酮對(duì)大鼠肝臟脂代謝影響的可能機(jī)制。
　　方法：體重為150-180g的雄性Wistar大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為：普通飼料組（STD），普通飼料+50μg/kg BPA組（STD-B

2、PA50），普通飼料+50μg/kg BPA+10mg/kg染料木黃酮組（STD-（BPA50+G）），普通飼料+10mg/kg染料木黃酮組（STD-G）；高脂對(duì)照組（HFD），高脂飼料+50μg/kg BPA組（HFD-BPA50），高脂飼料+50μg/kg BPA+10mg/kg染料木黃酮組（HFD-（BPA50+G）），高脂飼料+10mg/kg染料木黃酮組（HFD-G）。在干預(yù)的第0周和第21周末測(cè)定血糖、胰島素、血清TG和TC水

3、平；在干預(yù)的30周末進(jìn)行腹膜內(nèi)葡萄糖耐量試驗(yàn)(IPGTT)，在干預(yù)的35周末，處死大鼠，測(cè)定生化指標(biāo)。干預(yù)21周末，選取STD、STD-BPA50、HFD和HFD-BPA50組大鼠作為父代，與健康成年雌性Wistar大鼠合籠。子代大鼠出生后計(jì)算性別比、記錄出生窩重和每窩子代個(gè)數(shù)。子代斷奶后給予普通飼料直至10周齡后處死。用免疫熒光法測(cè)定胰腺β細(xì)胞面積；用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)大鼠胰腺組織LC3、Beclin-1和Bip的mRNA表達(dá)水平

4、；采用免疫組化和蛋白免疫印跡法檢測(cè)胰腺LC3的蛋白表達(dá)水平；用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)β細(xì)胞上的LC3蛋白表達(dá)。測(cè)定子代大鼠血清生化指標(biāo)，計(jì)算HOMA指數(shù)和胰島素敏感性指數(shù)。用HE染色觀察父代大鼠肝臟組織的病理變化；用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)肝臟中脂代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)水平；用蛋白免疫印記法檢測(cè)肝臟中 PPARα、PPARγ和LC3蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）干預(yù)35周后，HFD-BPA50組大鼠血糖水平在明顯高于HFD組（P＜0.01）

5、；STD-BPA50組胰島素水平明顯高于STD組（P<0.05）和STD-G組（P＜0.01）。在IPGTT實(shí)驗(yàn)中，HFD-BPA50組在給予葡萄糖后的第15min和30min血糖水平和血糖曲線下面積明顯高于HFD組（P<0.05）。此外，在干預(yù)35周后STD-BPA50組的HOMA指數(shù)明顯高于STD組和STD-G組（P<0.01），并且胰島素敏感指數(shù)明顯低于STD組（P<0.05）。在干預(yù)21周后HFD-(BPA50+G)和HFD-G

6、組大鼠的HOMA指數(shù)明顯低于HFD-BPA50組（P<0.05和P<0.01）。在干預(yù)35周末，HFD-G組的血清TG水平明顯低于HFD-BPA50組（P<0.05）；并且HFD-G組血清TC水平明顯低于HFD組和HFD-BPA50組（P<0.05）。在干預(yù)35周末，與HFD組相比，HFD-（BPA50+G）組和HFD-G組肝臟中TG和TC水平明顯降低（P<0.05）。（2）高脂飲食和 BPA干預(yù)明顯增加了父代大鼠的胰腺β細(xì)胞數(shù)量（P<

7、0.01）；高脂飲食和BPA干預(yù)還明顯增加了父代大鼠胰腺LC3、Beclin-1和Bip的mRNA表達(dá)水平；并且高脂喂養(yǎng)和BPA干預(yù)的大鼠胰腺LC3蛋白表達(dá)水平也明顯高于各自的對(duì)照組（P<0.01）；高脂飲食和BPA干預(yù)增加了胰腺β細(xì)胞上的LC3表達(dá)水平（P<0.01）。子代大鼠的出生性別比、窩重和窩別大小、血糖和血脂無(wú)明顯差別（P>0.05）。（3）HFD組、HFD-（BPA50+G）組和HFD-G組大鼠肝臟SREBP-1C的mRNA

8、表達(dá)水平明顯高于STD組（P<0.05）；HFD組大鼠肝臟PPARγ的mRNA表達(dá)水平明顯高于STD組、HFD-（BPA50+G）組和HFD-G組（P<0.05），并且HFD組大鼠肝臟的PPARγ蛋白質(zhì)表達(dá)水平明顯高于STD組、HFD-（BPA50+G）組和HFD-G組（P<0.05）；HFD組大鼠肝臟LC3的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平低于STD組（P<0.01，P<0.05）。
　　結(jié)論：（1）長(zhǎng)期BPA暴露導(dǎo)致了大鼠的胰島素抵抗