染料木黃酮對體外培養(yǎng)的兔眼結(jié)膜成纖維細(xì)胞生長的影響.pdf

1、目的:研究染料木黃酮(Genistein,Geni)對體外培養(yǎng)的兔眼結(jié)膜成纖維細(xì)胞(rabbit coniunctival fibroblasts,RCF)增殖的影響.方法:將RCF進(jìn)行體外原代和傳代培養(yǎng),繪制生長曲線.取第3-5代細(xì)胞做藥物抑制試驗:(1)將其接種于96孔板,繼續(xù)培養(yǎng)24h后,加入不同濃度的Geni(0.3125-40μg·ml-1)、5-Fu(10<'-2>-10<'2>μg·ml<'-1>)以及聯(lián)合組[(Geni

2、5μg+5-Fu 1μg)·ml<'-1>和(Geni 10μg+5-Fu 1μg)·ml-1]作用48h后,用MTT法測定吸光度,計算細(xì)胞生長抑制率;(2)接種方法同上,加入不同濃度的Geni(0.625-40μg·ml-1)分別作用1、3、5、7天后,用MTT法測定同上;(3)細(xì)胞培養(yǎng)24h后加入0、5、10和20μg·ml-1的Geni,48h后用流式細(xì)胞儀檢測藥物對RCF細(xì)胞周期的影響;(4)采用Annexin V-/PI雙標(biāo)記

3、染色法分析0、2.5和10μg·ml<'-1>的Geni對兔結(jié)膜成纖維細(xì)胞凋亡的影響.結(jié)果:兔眼結(jié)膜成纖維細(xì)胞經(jīng)染料木黃酮作用48h后,0.3125、0.625 μ g·ml-1對細(xì)胞的生長無明顯抑制作用,而2.5-40 μ g·ml-1的抑制率分別為27.16％、34.02％、44.55％、55.08％、58.90％;1、10、100 μ g·ml-1的5-Fu的抑制率分別為41.67％、62.88％、69.81％,與對照組相比有顯著

4、性差異.不同濃度的Geni作用1、3、5、7天的細(xì)胞抑制率,隨時間、劑量增加而加大.Geni(5、10 μ g·ml<'-1>)與5-Fu(1 μ g·ml<'-1>)聯(lián)用,對細(xì)胞生長的抑制率分別為45.57％和49.09％,具有協(xié)同效應(yīng).流式細(xì)胞儀顯示,RCF經(jīng)5-20 μ g·ml-1Geni作用48h后,G2-M期細(xì)胞從6.34％增至9.37％.RCF經(jīng)10 μ g·ml<'-1>作用48h可誘發(fā)細(xì)胞凋亡.結(jié)論:體外培養(yǎng)兔眼結(jié)膜成