以自體結(jié)膜成纖維細(xì)胞為飼養(yǎng)細(xì)胞構(gòu)建組織工程兔角膜上皮.pdf

1、目的：創(chuàng)建一種新的組織工程角膜上皮構(gòu)建系統(tǒng)，以自體結(jié)膜成纖維細(xì)胞為飼養(yǎng)細(xì)胞，避免異種飼養(yǎng)細(xì)胞的介入，用于治療角膜緣干細(xì)胞缺乏性疾病。 方法： 以組織塊法體外培養(yǎng)新西蘭白兔結(jié)膜成纖維細(xì)胞。使用不同濃度絲裂霉素C37℃下處理培養(yǎng)的新西蘭白兔自體結(jié)膜成纖維細(xì)胞(第1-2代)2小時(shí)，以MTT比色法檢測(cè)絲裂霉素C的毒性，觀察安全劑量范圍內(nèi)絲裂霉素C處理對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用，選取最適濃度處理兔結(jié)膜成纖維細(xì)胞制作飼養(yǎng)細(xì)胞。取兔頰部口

2、腔粘膜上皮組織，以人去上皮羊膜上為載體，DMEM:F12(3:1)為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，構(gòu)建組織工程角膜上皮(n=8)。觀察兔口腔黏膜上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、分化狀況，并對(duì)構(gòu)建的組織工程角膜上皮進(jìn)行組織病理學(xué)和電子顯微鏡檢查。 結(jié)果： 兔結(jié)膜成纖維細(xì)胞可耐受濃度≤25μg/ml絲裂霉素C37℃處理2小時(shí)。制作飼養(yǎng)細(xì)胞的最適合處理濃度為Sμg/ml。兔口腔粘膜上皮細(xì)胞于2-4天內(nèi)從組織塊周邊爬出，8-10天左右即可接近融合。融合的細(xì)

3、胞呈現(xiàn)典型的上皮樣細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞大小均一，排列緊密，邊界清晰，呈現(xiàn)鋪路石樣。以兔結(jié)膜成纖維細(xì)胞為飼養(yǎng)細(xì)胞構(gòu)建的組織工程角膜上皮組織形態(tài)與正常兔角膜上皮相似，呈現(xiàn)為4-5層分化良好的復(fù)層上皮，基底部細(xì)胞呈矮柱狀，基底上層是2-3層的翼狀細(xì)胞，表層細(xì)胞扁平。電子顯微鏡檢查顯示構(gòu)建的組織工程角膜上皮的顯微結(jié)構(gòu)亦與正常兔角膜上皮接近，包括細(xì)胞間以大量橋粒連接，基底細(xì)胞通過(guò)許多半橋粒牢固連接于羊膜以及表層上皮表面有微絨毛樣結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：