組織工程技術(shù)構(gòu)建兔角膜基質(zhì)、上皮組織初步探索.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文組織工程技術(shù)構(gòu)建兔角膜基質(zhì)、上皮組織初步探索姓名：胡曉潔申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：整形外科學(xué)指導(dǎo)教師：曹誼林2003.4.1組織工程技術(shù)構(gòu)建兔角膜基質(zhì)、上皮組織初步探索中文摘要目的角膜移植是臨床角膜盲唯一可靠、有效的治療手段。角膜供體匱乏限制了角膜移植手術(shù)的開展。為解決臨床角膜移植供體匱乏，我們進(jìn)行了組織工程技術(shù)構(gòu)建兔角膜上皮組織和角膜基質(zhì)組織的探索。材料與方法1應(yīng)用組織工程技術(shù)構(gòu)建角膜基質(zhì)組織11分離獲取新生

2、兔角膜基質(zhì)細(xì)胞，擴(kuò)增、培養(yǎng)。收集原代培養(yǎng)7天的新生兔角膜基質(zhì)細(xì)胞，以107Iral的濃度50pl接種于聚羥基乙酸，培養(yǎng)一周，進(jìn)行掃描電鏡(sEM520)觀察。體外繼續(xù)培養(yǎng)，于第2、3和B周取材，組織學(xué)觀察和透射電鏡觀察。12細(xì)胞一生物材料復(fù)合物體外培養(yǎng)一周后，植入Balb／c裸鼠皮下。將正常角膜組織植入裸鼠皮下對(duì)側(cè)位置作為對(duì)照組。術(shù)后第2、4和6周取材，組織學(xué)觀察，測(cè)定第6周新生組織和正常的角膜組織膠原纖維直徑。13角膜基質(zhì)細(xì)胞聚羥基乙

3、酸復(fù)合物植入母兔角膜基質(zhì)層內(nèi)，術(shù)后持續(xù)觀察8周。同時(shí)，對(duì)側(cè)眼采用與實(shí)驗(yàn)組相同的手術(shù)方法在角膜基質(zhì)層內(nèi)植入單純的聚羥基乙酸，為對(duì)照組。術(shù)后第3、6和8周取材，組織學(xué)觀察。第8周，新生組織行透射電鏡觀察，測(cè)定組織膠原纖維直徑。14構(gòu)建攜帶EGFP基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體PLNCX2一EGFP，轉(zhuǎn)染PT67包裝細(xì)胞，收集其病毒液，轉(zhuǎn)染新生兔角膜基質(zhì)細(xì)胞。將轉(zhuǎn)染PLNCX2EGFP后的角膜基質(zhì)細(xì)胞一聚羥基乙酸復(fù)合物植入母兔角膜基質(zhì)層內(nèi)，構(gòu)建角膜