染料木黃酮對(duì)宿主和HCMV編碼的IE基因相關(guān)microRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：⑴應(yīng)用染料木黃酮（genistein，Gen）作藥物，探討在人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染人星形膠質(zhì)細(xì)胞（human astrocyte，AS）中，Gen對(duì)HCMVIE基因的作用及對(duì)與主要即刻早期啟動(dòng)子（major immediate early promoter，MIEP）結(jié)合的組蛋白H3乙?；挠绊?。⑵探討宿主和HCMV的microRNA（miRNA）在Gen抗HCMV感染AS中的作用

2、。
　　方法：①ASs由人神經(jīng)干細(xì)胞（human neural stem cell，NSC）分化而來，HCMV于人胚肺中（human embryonic lung fibroblast，HELFs）擴(kuò)增，TCID50法測(cè)其滴度。②Cell counting kit-8（CCK-8)實(shí)驗(yàn)測(cè)不同藥物濃度下的細(xì)胞活性與細(xì)胞毒性，以選出合適的藥物濃度。③RT-qPCR測(cè)IE1、IE2基因及細(xì)胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的

3、表達(dá)變化。④染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation assay，ChIP）檢測(cè)與HCMV MIEP結(jié)合的組蛋白H3乙酰化的改變。
　　結(jié)果：⑴CCK-8結(jié)果顯示，10μmol/L G+V組的cck-8值均高于同時(shí)間組的V組。⑵形態(tài)學(xué)觀察，G組與對(duì)照組無(wú)明顯差別，V組細(xì)胞病變明顯，V+G組與G+V組的細(xì)胞狀態(tài)相對(duì)V組要好，先加藥的G+V組的細(xì)胞狀態(tài)相對(duì)后加藥的V+G組要好。⑶RT-qPCR結(jié)果表

4、明，同V組相比，10μmol/L G+V與V+G組會(huì)降低IE1、IE2基因的表達(dá)。⑷RT-qPCR結(jié)果表明，同V組相比，10μmol/L G+V與V+G組能逆轉(zhuǎn)部分hsa-miR-200 miRNA家族及miR-UL112的下降。⑸ChIP結(jié)果顯示，10μmol/L G+V與V+G組會(huì)降低MIEP結(jié)合的組蛋白H3的乙?；?br>　　結(jié)論：①10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖異常。②Gen能一定程度抑制IE