葎草總黃酮對(duì)乳腺上皮細(xì)胞相關(guān)炎癥和泌乳基因表達(dá)的影響.pdf

1、為研究葎草總黃酮對(duì)乳腺上皮細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響，本實(shí)驗(yàn)將奶牛乳腺上皮細(xì)胞作為細(xì)胞模型，利用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活率及生長(zhǎng)狀況，分別用不同濃度的黃酮溶液(0、100、200、400、600、800mg/L)刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞12h，再用相同濃度的黃酮溶液（400mg/L）作用于奶牛乳腺上皮細(xì)胞不同時(shí)間(0h、1h、4h、9h、12h、16h、24h)，分別提取細(xì)胞的總RNA，運(yùn)用熒光定量PCR法測(cè)定GHR、β-CN、IL-6、IL-8、

2、TNF-α和IFN-γ泌乳相關(guān)基因的表達(dá)并進(jìn)行研究。得出如下結(jié)果：
　　1)細(xì)胞生長(zhǎng)到第4d時(shí)，存活的細(xì)胞數(shù)最多，在第4d以后，存活的細(xì)胞數(shù)量呈下降趨勢(shì)，符合MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)的一般規(guī)律。
　　2)不同濃度的黃酮溶液刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞12h后，IL-6在黃酮濃度為100-800mg/L時(shí)表達(dá)量降低且差異均顯著（P＜0.05），但在800mg/L時(shí)表達(dá)量最低；IL-8的表達(dá)量在黃酮濃度為800mg/L時(shí)也有所降低，但差異不

3、顯著（P＞0.05）；在黃酮濃度為100-600mg/L時(shí)TNF-α的表達(dá)量都降低，但在200mg/L時(shí)表達(dá)量最低（P＜0.05）；IFN-γ的表達(dá)量在黃酮濃度為200-400mg/L時(shí)有所降低，但在200mg/L時(shí)其表達(dá)量最低（P＜0.05）。
　　3)不同濃度的黃酮溶液刺激奶牛乳腺上皮細(xì)胞12h后，黃酮濃度在200mg/L時(shí)促進(jìn)GHR的表達(dá)，但差異不顯著（P＞0.05）；在黃酮的濃度為100-800mg/L時(shí)對(duì)β-CN的表達(dá)有

4、上調(diào)的作用，200-600mg/L的黃酮濃度對(duì)β-CN的表達(dá)可顯著提高（P＜0.05），但在黃酮濃度為400mg/L時(shí)，β-CN的表達(dá)量最高。
　　4)相同濃度（400mg/L）的黃酮溶液作用于乳腺上皮細(xì)胞不同時(shí)間，IL-6在作用于細(xì)胞4-9h時(shí)表達(dá)量降低（P＜0.05），但在作用9h時(shí)表達(dá)量顯著降低；IL-8在作用1h時(shí)表達(dá)量降低，差異顯著（P＜0.05）；TNF-α在作用1-24h時(shí)表達(dá)量都降低，但在12h時(shí)，其表達(dá)量降低明顯

5、（P＜0.05）；IFN-γ的表達(dá)量在作用細(xì)胞1-24h時(shí)也降低，但在12h時(shí)降低顯著（P＜0.05）。
　　5)相同濃度（400mg/L）的黃酮溶液作用于乳腺上皮細(xì)胞不同時(shí)間，在作用于細(xì)胞4-9h時(shí)對(duì)GHR的表達(dá)都有促進(jìn)作用，但在作用4h時(shí)其表達(dá)明顯升高（P＜0.05）；在作用4-12h時(shí)，對(duì)β-CN的表達(dá)也有促進(jìn)作用且差異顯著（P＜0.05），但在作用12h時(shí)表達(dá)量最高。
　　本研究可以得出如下結(jié)論：
　　1)對(duì)奶

6、牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，在第4d時(shí)，此細(xì)胞的存活力最強(qiáng)。
　　2)葎草黃酮對(duì)乳腺上皮細(xì)胞相關(guān)炎癥因子的表達(dá)與其劑量及作用時(shí)間有關(guān)，黃酮濃度為800mg/L，作用于乳腺上皮細(xì)胞(MAC-T)9h后，可以顯著地降低IL-6炎癥因子的表達(dá)；黃酮濃度為200mg/L，作用時(shí)間12h后，能顯著地降低TNF-α和IFN-γ的表達(dá)。這對(duì)乳腺細(xì)胞相關(guān)炎癥基因的表達(dá)可能有一定的抑制作用。
　　3)培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞第4天時(shí)，細(xì)胞的存活力最強(qiáng)