TSG-6通過調(diào)控Fas-FasL信號(hào)通路影響人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　腫瘤壞死因子α刺激基因-6(tumor necrosis factorα stimulated gene6，TSG-6)已被證實(shí)是一種具有抗炎作用的基因，其高表達(dá)于多種炎癥反應(yīng)或者類似炎癥的過程。我們最近的研究也表明TSG-6蛋白具有抗炎和抑制瘢痕形成的作用，但TSG-6蛋白參與瘢痕形成的機(jī)制尚不明確。
　　目的：
　　探究TSG-6是否通過Fas/FasL信號(hào)通路影響人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的凋亡及其機(jī)制。

2、
　　方法：
　　采用膠原酶消化法分離純化得到人增生性瘢痕成纖維（hypertrophic scar fibroblasts，HSF）細(xì)胞，構(gòu)建pLVX-Puro-TSG-6重組慢病毒載體，感染HSF細(xì)胞，并行qPCR和Western Blot檢驗(yàn)各組細(xì)胞中TSG-6的表達(dá)。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡情況,MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖情況。用qPCR和Western Blot的方法檢測(cè) Fas/FasL信號(hào)通路中凋

3、亡相關(guān)基因的mRNA和蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果與結(jié)論：
　　成功地培養(yǎng)了原代人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞，并成功地構(gòu)建了重組慢病毒載體且穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染了HSF，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)組即 TSG-6過表達(dá)組（pLVX-Puro-TSG-6組）細(xì)胞中TSG-6的表達(dá)上調(diào)。與對(duì)照組即TSG-6過表達(dá)對(duì)照組（pLVX-Puro組）和HSF對(duì)照組（untransfected HSF組）相比，實(shí)驗(yàn)組（pLVX-Puro-TSG-6組）細(xì)胞凋亡率顯著上升

4、（P<0.05），而細(xì)胞增殖則明顯減少（P<0.05）。qPCR和Western Blot結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染TSG-6表達(dá)載體的HSF細(xì)胞，其Fas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-3基因mRNA水平和對(duì)應(yīng)蛋白表達(dá)量顯著升高（P<0.05）；HSF對(duì)照組、TSG-6過表達(dá)對(duì)照組組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TSG-6可能通過激活Fas/FasL信號(hào)通路，促進(jìn)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的凋亡、抑制其增殖，從而抑制增生性瘢痕的增生。