PBEF激活P38MAPK-ERK信號通路增加缺氧-復(fù)氧損傷的內(nèi)皮細胞通透性相關(guān)研究.pdf

1、目的:
　　根據(jù)前期研究缺氧-復(fù)氧處理正常培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞一定時間，模擬臨床心臟手術(shù)過程中肺缺血再灌注時肺內(nèi)皮細胞的病理生理變化,RNAi轉(zhuǎn)染抑制前B細胞克隆增強因子(PBEF)基因表達，檢測PBEF表達變化,研究PBEF表達水平對TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥因子和細胞收縮力、細胞-細胞間粘附、細胞-基質(zhì)間粘附的作用,研究PBEF在缺氧-復(fù)氧損傷的內(nèi)皮細胞通透性變化過程中與P38MAPK/ERK信號途徑的激活是否密切

2、相關(guān)。
　　方法：
　　1、根據(jù)前期研究建立HUVECs缺氧(20h)／復(fù)氧(9h)模型、合成PBEFsiRNA序列。
　　2、根據(jù)對培養(yǎng)的HUVECs隨機采用缺氧-復(fù)氧和RNAi干預(yù)措施，分為缺氧復(fù)氧PBEFsiRNA轉(zhuǎn)染組、缺氧復(fù)氧siRNA陰性控制組、缺氧復(fù)氧組、正常培養(yǎng)組。
　　3、Western blot檢測各組中內(nèi)皮細胞PBEF表達水平、ELISA檢測TNF-α、IL-1β、IL-6的表達含量。

3、>　　4、Western blot檢測各組中內(nèi)皮細胞肌球蛋白輕鏈(MLC)及其磷酸化表達水平。
　　5、Western blot檢測各組HUVECs中鈣粘蛋白(VE-cadherin)、粘著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）及其磷酸化表達水平和樁蛋白（paxillin）、連環(huán)蛋白(β-Catenin)表達水平。
　　6、Western blot檢測各組HUVECs中P38、ERK及其磷酸化表達水平。

4、
　　結(jié)果：
　　1、PBEF在缺氧-復(fù)氧誘導(dǎo)損傷的HUVECs中表達明顯增加，PBEF可促進TNF-α、IL-1β、IL-6炎癥介質(zhì)的表達釋放（P＜0.01）。
　　2、PBEF可通過促進MLC、VE-cadherin、FAK磷酸化和β-Catenin、paxillin蛋白的表達，改變細胞收縮力，細胞-細胞附著力、細胞-基質(zhì)附著力，改變內(nèi)皮細胞結(jié)構(gòu)（P＜0.01）。
　　3、PBEF可通過 P38MAPK和 E