前B細胞克隆增強因子(PBEF)在缺氧-復(fù)氧內(nèi)皮細胞通透性增加的相關(guān)性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立缺氧/復(fù)氧模型,檢測缺氧/復(fù)氧后內(nèi)皮細胞中PBEF(pre-B-cellcolony-enhancing factor,前B細胞克隆增強因子)的蛋白表達變化,通過RNA干擾沉默PBEF基因探討PBEF與VEGF(Vascular endothelial growth factor,血管內(nèi)皮細胞生長因子)和(Phosphorylation-myosin light chain kinase,磷酸化的肌球蛋白輕鏈)的關(guān)系,研究PB

2、EF在缺氧/復(fù)氧后內(nèi)皮細胞通透性增加的機制。
  方法:1、根據(jù)文獻合成PBEFsiRNA, HUVEC根據(jù)處理的不同分為空脂質(zhì)體對照組、陰性對照組和PBEFsiRNA組,通過RT-PCR和western blot分別在基因水平和蛋白水平檢測PBEF的表達情況。
  2、建立內(nèi)皮細胞缺氧/復(fù)氧模型,根據(jù)對HUVEC處理的不同將實驗分為正常對照組、缺氧(20小時)/復(fù)氧(3小時)組、缺氧(20小時)/復(fù)氧(6小時)組、缺氧(2

3、0小時)/復(fù)氧(9小時)組、缺氧(20小時)/復(fù)氧(12小時);Westernblot檢測PBEF的蛋白表達情況。
  3、根據(jù)對HUVEC處理的不同將實驗分為:Ⅰ組(缺氧/復(fù)氧+空脂質(zhì)體對照組),Ⅱ組(缺氧/復(fù)氧+陰性對照組),Ⅲ組(缺氧/復(fù)氧+PBEFsiRNA組)、Ⅳ組(空脂質(zhì)體對照組),western blot檢測VEGF和p-MLC的表達情況。
  結(jié)果:1、PBEFsiRNA干擾PBEF的mRNA和蛋白表達水平與

4、脂質(zhì)體對照、陰性對照相比明顯下調(diào)(P<0.05);陰性對照組和脂質(zhì)體對照組之間差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
  2、與正常對照組相比缺氧/復(fù)氧組PBEF蛋白表達明顯增加,復(fù)氧3h開始升高,9h達峰值,持續(xù)到12h后開始下降。(P<0.05)
  3、對HUVEC進行缺氧/復(fù)氧和RNA干擾后,Ⅰ組和Ⅱ組與Ⅳ組相比VEGF、p-MLC表達明顯升高(P<0.05);Ⅲ組與Ⅰ組和Ⅱ組相比VEGF、p-MLC表達明顯下降(P<0

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