Talin-1調(diào)控網(wǎng)絡(luò)促進(jìn)肝癌生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、目的：Talin-1是一種大分子骨架蛋白，其能促進(jìn)肝癌的進(jìn)展。然而Talin-1促進(jìn)肝癌進(jìn)展的機(jī)制目前尚無報(bào)道。本文通過人全基因芯片分析比較肝癌細(xì)胞和敲低Talin-1的肝癌細(xì)胞的全基因表達(dá)譜來分析Talin-1促進(jìn)肝癌發(fā)生發(fā)展的潛在機(jī)制。
　　方法：分別應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（real-time quantitative assay，qRT-PCR）及Western blot（WB）檢測(cè)肝癌細(xì)胞株MHCC-97L及

2、正常肝上皮細(xì)胞LO2中Talin-1 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。使用病毒轉(zhuǎn)染MHCC-97L細(xì)胞制備穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的Talin-1敲低MHCC-97L細(xì)胞株（sh-Talin-1 MHCC-97L）。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)法分析比較MHCC-97L細(xì)胞和sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞的生長(zhǎng)能力；使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析比較MHCC-97L細(xì)胞和sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。使用人全基因芯片（4

3、0000個(gè)基因）分析 MHCC-97L細(xì)胞和sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞中差異表達(dá)的基因；使用GO富集分析芯片數(shù)據(jù)，分析Talin-1調(diào)控的生物學(xué)行為；使用Cytoscape v3.4.0制作Talin-1的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。使用GraphPad Prism5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果： MHCC-97L細(xì)胞及LO2細(xì)胞中Talin-1均有表達(dá)，且Talin-1mRNA（P＜0.001）及蛋白（P＜0.001）在MHCC-9

4、7L細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于其在LO2細(xì)胞中的表達(dá)水平。Talin-1 mRNA（P＜0.001）及蛋白（P＜0.001）在MHCC-97L細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于其在sh-Talin-1 MHCC-97L細(xì)胞中的表達(dá)水平。進(jìn)一步通過全基因芯片分析發(fā)現(xiàn)在這40000個(gè)基因中, Talin-1敲低后3099個(gè)基因表達(dá)發(fā)生改變，其中1924個(gè)基因表達(dá)上調(diào)，2175個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。通過 GO富集分析發(fā)現(xiàn)Talin-1促進(jìn)許多HCC進(jìn)展相關(guān)的生物學(xué)行為

5、，包括離子轉(zhuǎn)運(yùn)（相關(guān)基因：CAV3與KCNE3等），膜去極化（相關(guān)基因：CAV3與KCNE3等），細(xì)胞生長(zhǎng)（相關(guān)基因：EDN1，IGFBP5，CYR61等）及細(xì)胞粘附（相關(guān)基因：MUC1，SLAMF7，WISP1等）。最后通過檢索已發(fā)表文章和數(shù)據(jù)庫并制作 Talin-1調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，我們發(fā)現(xiàn)Talin-1能調(diào)控細(xì)胞周期蛋白（如Cyclin D1, BCL-2家族和p53網(wǎng)絡(luò)），EMT相關(guān)蛋白（如E-鈣黏蛋白，N-鈣黏蛋白 and vimen