Legumain促進(jìn)胃癌的生長和轉(zhuǎn)移及機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　以往研究證實(shí)豆蛋白酶(Legumain)在很多實(shí)體瘤中高表達(dá)，比如乳腺癌、結(jié)腸癌等。本研究選取人胃腺癌標(biāo)本（包括癌旁組織、腫瘤起源、腫瘤侵襲前緣和腫瘤轉(zhuǎn)移灶），檢測了Legumain的表達(dá)情況，探討Legumain在胃腺癌腫瘤組織標(biāo)本中的表達(dá)是否與病人的預(yù)后相關(guān)，評估在胃腺癌組織中Legumain的表達(dá)是否與MMP-2的表達(dá)有相關(guān)性，同時探討Legumain促進(jìn)胃癌生長和轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
　　[方法]
　　1

2、.首先應(yīng)用WesternBlot、Real-timePCR和免疫組織化學(xué)分析了Legumain在4例胃腺癌病人癌旁組織和腫瘤組織中的表達(dá)情況;
　　2.構(gòu)建Legumain表達(dá)質(zhì)粒和基因敲除質(zhì)粒，應(yīng)用細(xì)胞劃痕試驗，檢測在Legumain過表達(dá)和基因敲除的情況下對胃癌細(xì)胞遷移的影響;
　　3.應(yīng)用Legumain表達(dá)質(zhì)粒和基因敲除質(zhì)粒轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞，檢測對MMP-2表達(dá)的影響;
　　4.構(gòu)建腺病毒感染的Legumain穩(wěn)轉(zhuǎn)

3、株，并構(gòu)建裸鼠胃癌原位模型，分別檢測在應(yīng)用Legumain抑制劑AEPI治療和過表達(dá)Legumain兩種情況下對裸鼠胃癌生長和轉(zhuǎn)移的影響;
　　5.應(yīng)用189例胃腺癌病人組織芯片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，分析Legumain和MMP-2在腫瘤起源、侵襲前緣及轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)，并分析Legumain和MMP-2在三種不同來源腫瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性，同時進(jìn)行K孕plan-Meier生存期分析。
　　[結(jié)果]
　　1.Leguma

4、in在胃癌腫瘤組織中的表達(dá)水平高于在癌旁組織的表達(dá);
　　2.在胃癌細(xì)胞系中過表達(dá)Legumain可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移;敲除Legumain可以減弱胃癌細(xì)胞的遷移;
　　3.在胃癌細(xì)胞系中過表達(dá)Legumain能夠使active-MMP-2表達(dá)增高;
　　4.動物實(shí)驗結(jié)果顯示，過表達(dá)Legumain組的荷瘤裸鼠，胃腫瘤的重量顯著高于對照組(p=0.0026)，肝臟表面腫瘤轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量顯著高于對照組(p=0.0001)

5、;AEPI治療組的荷瘤裸鼠，胃腫瘤的重量顯著低于對照組(p=0.0016)，肝臟表面腫瘤轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量顯著低于對照組(p=0.0462);
　　5.組織芯片免疫組織化學(xué)染色顯示，Legumain在癌旁組織中低表達(dá)甚至不表達(dá)，而在腫瘤起源、侵襲前緣和腫瘤轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)較高;Legumain在胃腺癌腫瘤起源中的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)，p值小于0.01;Legumain在胃腺癌腫瘤侵襲前緣的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)（p值小于0.01），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有

6、關(guān)(p=0.025);Legumain在胃腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)，p值小于0.01;Legumain與MMP-2的表達(dá)在起源、侵襲前緣和轉(zhuǎn)移灶中有相關(guān)性，p值小于0.01;Legumain在腫瘤起源的表達(dá)與胃腺癌病人術(shù)后生存期有相關(guān)性，p值小于0.0001;Legumain和MMP-2在腫瘤起源中的協(xié)同表達(dá)與胃腺癌病人術(shù)后生存期有關(guān)，p值小于0.0001。
　　[結(jié)論]
　　1.Legumain在胃腺癌病人中高表