長鏈非編碼RNA NR-028414在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：
　　通過檢測長鏈非編碼RNA（lncRNA） NR-028414在腎透明細(xì)胞癌樣本中和正常腎組織中的表達(dá)，研究其與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展及臨床病理因素之間的關(guān)系，探討lncRNA NR-028414在腎透明細(xì)胞癌診治中的臨床價值;應(yīng)用基因功能喪失的方法，合成lncRNA NR-028414基因特異的的siRNA，研究抑制lncRNA NR-028414對腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞A498增殖、凋亡、侵襲及遷移的作用，討論其作為腎透明

2、細(xì)胞癌新靶點(diǎn)的可能。
　　方法：
　　(1)收集青島大學(xué)附屬醫(yī)院泌尿外科2011年1月至2015年1月行手術(shù)治療并術(shù)后病理確診為腎透明細(xì)胞癌的患者283例（術(shù)前未化療或放療）。283例患者均有完整的臨床資料，同時選取正常腎組織標(biāo)本30例作為對照。應(yīng)用TRIZOL法抽提腎透明細(xì)胞癌組織和正常腎組織的總RNA，并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，應(yīng)用實(shí)時定量PCR方法測定283例腎透明細(xì)胞癌組織及30例正常腎組織中l(wèi)ncRNA NR-028414的表

3、達(dá)，同時結(jié)合Fuhrman分級和臨床分期，運(yùn)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究lncRNA NR-028414的表達(dá)與患者臨床資料之間的關(guān)系；(2)應(yīng)用基因功能喪失的方法，合成lncRNA NR-028414基因特異的的siRNA，轉(zhuǎn)染腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞A498，減少lncRNA NR-028414的表達(dá)，用體外細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（CCK8法）檢測細(xì)胞的增殖活性的改變，體外細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)（流式細(xì)胞術(shù)）檢測細(xì)胞的凋亡狀況，用Transwel

4、l細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲能力，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力。
　　結(jié)果：
　　(1)實(shí)時PCR顯示，在腎透明細(xì)胞癌組織中，lncRNA NR-028414呈明顯過表達(dá)，正常腎組織中，lncRNA NR-028414則呈弱表達(dá)（P＜0.001）；lncRNA NR-028414在Fuhrman分級高級別組中表達(dá)水平明顯高于Fuhrman分級低級別組(P＜0.05)，在臨床分期Ⅲ+Ⅳ期組中表達(dá)水平高于臨床分期Ⅰ+Ⅱ期組(P

5、＜0.05)，表明lncRNA NR-028414在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)可能與腫瘤惡性程度相關(guān)。lncRNA NR-028414的表達(dá)水平在患者性別、年齡水平上無明顯差異(P＞0.05)。（2）應(yīng)用轉(zhuǎn)染lncRNA NR-028414-siRNA轉(zhuǎn)染腎透明細(xì)胞癌系A(chǔ)498干擾lncRNA NR-028414基因表達(dá)后，lncRNA NR-028414的表達(dá)明顯減少（P＜0.05），腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖活性呈明顯降低水平(P＜0.05)、

6、同時細(xì)胞凋亡增加(P＜0.05)；lncRNA NR-028414被抑制后腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞Transwell實(shí)驗(yàn)示細(xì)胞侵襲水平下降(P＜0.05)，同時也有細(xì)胞遷移能力下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　在腎透明細(xì)胞癌中，lncRNA NR-028414呈過表達(dá)，說明lncRNA NR-028414可能與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。lncRNA NR-028414的表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌的Fuhrman分級和臨床分期呈正相關(guān)