自噬在慢性炎癥所致胰島細(xì)胞損傷過程中作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本課題以GSK-3β為靶點(diǎn)，探討慢性低度炎癥是否通過誘導(dǎo)自噬造成胰島細(xì)胞損傷。
　　方法：將8周齡雄性c57BL小鼠分為4組：1.N組（正常對(duì)照組）；2.HF組（高脂對(duì)照組）；3.LPS處理組；4.氯化鋰（LiCl）處理組，每組10只。于第7周末、11周末行腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)和胰島素耐量試驗(yàn)，并計(jì)算曲線下面積；處死小鼠（每組5只），留取胰腺、肝臟及脂肪等組織；HE染色觀察胰島形態(tài)改變；F4/80免疫組化檢測(cè)炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況

2、；TUNEL及免疫組化染色（PDX-1及 PCNA）檢測(cè)β細(xì)胞的凋亡與增殖情況；免疫熒光染色了解胰島β細(xì)胞的自噬活性；其余小鼠胰島分離純化，并通過Western Blot定量檢測(cè)LC3、P62、GSK3β及p-GSK3β的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.7周末IPGTT示：與N組相比，HF組在糖負(fù)荷后30min血糖升高（P<0.05）；11周末IPGTT示：HF、LPS、LiCl組在除空腹血糖外各個(gè)時(shí)間點(diǎn)血糖與N組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、差異（P<0.05）；
　　2.HE染色示：與N組相比，未發(fā)現(xiàn)HF、LPS及LiCl各組胰島結(jié)構(gòu)的變化；
　　3.炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況：與N組、HF組相比，LPS組F4/80陽性水平明顯升高；與LPS組比，LiCl組F4/80陽性水平明顯降低；
　　4.胰島β細(xì)胞增殖情況：LPS組PCNA及PDX-1的表達(dá)水平升高，與HF組、N組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；
　　5.胰島β細(xì)胞凋亡情況：與N組相比，HF組胰島β細(xì)胞凋

4、亡增多（P<0.05）；LPS組的凋亡較HF進(jìn)一步增加（P<0.05）；與LPS組相比，LiCl組TUNEL陽性細(xì)胞明顯減少（P<0.05）；
　　6.胰島LC3、P62和GSK3β的表達(dá)：與N組相比，HF組LC3II/I增加（P<0.05），p-GSK3β/GSK3β、P62表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；LPS組LC3II/I降低，P62表達(dá)增加，p-GSK3β/GSK3β明顯降低，與HF組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；