自噬在慢性炎癥所致胰島細胞損傷過程中作用機制的研究.pdf

1、目的：本課題以GSK-3β為靶點，探討慢性低度炎癥是否通過誘導自噬造成胰島細胞損傷。
　　方法：將8周齡雄性c57BL小鼠分為4組：1.N組（正常對照組）；2.HF組（高脂對照組）；3.LPS處理組；4.氯化鋰（LiCl）處理組，每組10只。于第7周末、11周末行腹腔注射葡萄糖耐量試驗和胰島素耐量試驗，并計算曲線下面積；處死小鼠（每組5只），留取胰腺、肝臟及脂肪等組織；HE染色觀察胰島形態(tài)改變；F4/80免疫組化檢測炎細胞浸潤情況

2、；TUNEL及免疫組化染色（PDX-1及 PCNA）檢測β細胞的凋亡與增殖情況；免疫熒光染色了解胰島β細胞的自噬活性；其余小鼠胰島分離純化，并通過Western Blot定量檢測LC3、P62、GSK3β及p-GSK3β的表達。
　　結果：
　　1.7周末IPGTT示：與N組相比，HF組在糖負荷后30min血糖升高（P<0.05）；11周末IPGTT示：HF、LPS、LiCl組在除空腹血糖外各個時間點血糖與N組相比均有統(tǒng)計學

3、差異（P<0.05）；
　　2.HE染色示：與N組相比，未發(fā)現(xiàn)HF、LPS及LiCl各組胰島結構的變化；
　　3.炎細胞浸潤情況：與N組、HF組相比，LPS組F4/80陽性水平明顯升高；與LPS組比，LiCl組F4/80陽性水平明顯降低；
　　4.胰島β細胞增殖情況：LPS組PCNA及PDX-1的表達水平升高，與HF組、N組有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；
　　5.胰島β細胞凋亡情況：與N組相比，HF組胰島β細胞凋

4、亡增多（P<0.05）；LPS組的凋亡較HF進一步增加（P<0.05）；與LPS組相比，LiCl組TUNEL陽性細胞明顯減少（P<0.05）；
　　6.胰島LC3、P62和GSK3β的表達：與N組相比，HF組LC3II/I增加（P<0.05），p-GSK3β/GSK3β、P62表達差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；LPS組LC3II/I降低，P62表達增加，p-GSK3β/GSK3β明顯降低，與HF組有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；