MicroRNA-99a通過(guò)BMPR2基因靶向調(diào)節(jié)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞的早期軟骨細(xì)胞分化.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）是關(guān)節(jié)軟骨再生的重要來(lái)源，因?yàn)镸SCs具有軟骨細(xì)胞分化的潛能，并且易于獲取且可在體外擴(kuò)增。目前，可調(diào)節(jié)軟骨形成的特定microRNAs（miRNAs）尚未明確，其相關(guān)機(jī)制也未清晰，本研究旨在找出這些特定microRNAs并研究其機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用Real-time PCR、Western blot、免疫熒光顯微技術(shù)和阿新藍(lán)染色分析早期軟骨細(xì)胞分化中mi

2、RNAs、BMPR2、蛋白多糖、 ACAN和COL2A1的表達(dá)水平。應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因分析驗(yàn)證miRNAs和BMPR2的靶向關(guān)系。
　　結(jié)果：miRNAs通過(guò)與目標(biāo) mRNA結(jié)合來(lái)降低蛋白質(zhì)的合成，從而調(diào)節(jié)生物學(xué)過(guò)程。本研究中我們發(fā)現(xiàn)，在挪威棕色大鼠（Rattus Novegicus）間充質(zhì)干細(xì)胞（ rMSCs）早期軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中， miR-99a和miR-125b-3p的表達(dá)明顯升高。而抑制 miR-99a，能夠促進(jìn)軟骨

3、細(xì)胞早期分化過(guò)程中蛋白多糖的沉積，并增加ACAN和COL2A1的表達(dá)。因此，調(diào)低miR-99a的表達(dá)能夠促進(jìn)rMSCs的早期軟骨細(xì)胞分化。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)表明，miR-99a作用于骨形態(tài)發(fā)生蛋白Ⅱ型受體（bone morphogenetic protein receptor type2，BMPR2）的3'-UTR上的一個(gè)假定的結(jié)合位點(diǎn)，miR-99a的過(guò)表達(dá)能夠降低BMPR2蛋白的表達(dá)水平。在rMSCs早期軟骨細(xì)胞分化的過(guò)程中，總

4、p38和p-p38的表達(dá)在分化的第7天和第14天時(shí)增加；而在rMSC早期軟骨細(xì)胞分化的過(guò)程中，總p38和p-p38蛋白下降的水平取決于miR-99a過(guò)表達(dá)的水平。在 rMSC早期軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中，BMPR2的沉默能夠逆轉(zhuǎn)miR-99a對(duì)蛋白多糖沉積、ACAN、COL2A1以及總p38蛋白、p-p38蛋白表達(dá)的抑制作用。
　　結(jié)論：這個(gè)大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果，為miR-99a在早期軟骨細(xì)胞分化中所扮演的角色提供了實(shí)驗(yàn)證