沉默肌腱干細胞TGIF1基因促進腱骨愈合的相關研究.pdf

1、研究背景及目的：腱骨連接處是結締組織中的特殊形式，損傷之后很難形成纖維軟骨層，愈合能力較差。TGFβ在不同的階段通過不同的信號通路可產(chǎn)生雙向作用（成肌腱或成軟骨）。研究顯示TGIF1可抑制TGFβ通路下游軟骨基因的表達。肌腱干細胞作為新發(fā)現(xiàn)的干細胞，具有更強多向分化能力。本研究以肌腱干細胞為種子細胞，探討沉默肌腱干細胞中轉錄生長因子影響因子1（TGIF1）對腱骨損傷的促進作用。
　　方法：①從SD大鼠跟腱中分離、培養(yǎng)肌腱干細胞，并

2、對其進行鑒定，進行成骨、成軟骨及成脂誘導，觀察肌腱來源干細胞的克隆、增殖能力及多向分化的能力。②利用沉默或過表達TGIF1基因的肌腱干細胞進行成軟骨誘導，觀察各組成軟骨分化的能力。在成軟骨誘導后的3天、7天及21天對細胞微團進行定量PCR及Western blotting檢測，觀察軟骨及肌腱相關標記基因的表達情況。③將64只成年SD大鼠隨機4組，分別為纖維蛋白+肌腱干細胞沉默TGIF1組，纖維蛋白+肌腱干細胞過表達TGIF1組,纖維蛋白

3、+肌腱干細胞組和僅含纖維蛋白組。顯露并切斷大鼠岡上肌在肱骨大結節(jié)正常的插入點，去除插入點原有的纖維軟骨，在肌腱干細胞組注射1×106 TDSCs+纖維蛋白膠，僅含纖維蛋白組植入纖維蛋白膠，肌腱干細胞沉默TGIF1組注入1×106沉默TGIF1基因的肌腱干細胞+纖維蛋白膠，肌腱干細胞過表達TGIF1組植入1×106過表達TGIF1基因的肌腱干細胞+纖維蛋白膠。分別在術2周和4周取材進行組織學研究，評估腱骨平面的愈合情況。
　　結果：

4、①大鼠跟腱分離的TDSCs經(jīng)分離培養(yǎng)后具有較強的增殖能力，表面特異性抗原CD90陽性，CD73陽性，而CD34為陰性表達，多向分化實驗顯示TDSCs具有成骨、成軟骨及成脂肪分化的能力。②沉默或過表達肌腱干細胞TGIF1基因進行成軟骨分化，結果顯示沉默TGIF1基因的肌腱干細胞成軟骨能力增強，而過表達TGIF1基因的肌腱干細胞成軟骨能力減弱。③通過免疫共沉淀的方法發(fā)現(xiàn)TGIF1能夠結合Smad2，抑制Smad2的磷酸化。④纖維蛋白+肌腱干

5、細胞沉默TGIF1組術后2周在腱骨界面之間出現(xiàn)軟骨細胞纖維軟骨，術后4周腱骨界面纖維軟骨較其他各組明顯，且可見較多排列有序的膠原纖維，而纖維蛋白+肌腱干細胞過表達TGIF1組和僅含纖維蛋白組中腱骨連接處瘢痕組織明顯。在肌腱干細胞組中含有少量的纖維軟骨和瘢痕組織。Western blotting檢測纖維蛋白+肌腱干細胞沉默TGIF1組蛋白裂解物中軟骨相關蛋白較其他組多。
　　結論：這個研究顯示沉默肌腱干細胞中TGIF1的表達可以促進