2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩55頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、腱/韌帶是堅韌的結(jié)締組織,它們通過其結(jié)構(gòu)、力學性質(zhì)和外形的變化以響應外力的刺激,在運動中起著重要作用,但活動范圍超過極限或拉扯過劇,腱/韌帶常常會受到損傷甚至斷裂,嚴重影響人們的健康。腱/韌帶損傷的治療目前仍然是整形外科中具有挑戰(zhàn)性的問題,比如如何加快治療速度、提高治療質(zhì)量直至完全治愈等等,都是臨床上亟待解決的難題。
   骨髓間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一類具有增殖和多向分化潛能的特

2、殊細胞。在特定條件下,MSCs在體外可增殖并分化為成骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞和肌肉細胞等。這種增殖能力和分化可塑性為臨床上腱/韌帶損傷組織的修復帶來了希望,使腱/韌帶創(chuàng)傷的治療甚至組織工程化成為可能。
   MSCs的自我更新和分化行為高度依賴于其所處的特殊局部微環(huán)境。已有研究證明各種理化因素刺激或特殊細胞微環(huán)境對MSCs的增殖、分化等生物學行為起著重要的調(diào)節(jié)作用,但MSCs在腱/韌帶細胞微環(huán)境下的增殖、分化行為特征及其相關(guān)規(guī)

3、律人們還不清楚,有關(guān)這方面的研究不僅具有重要的理論意義,而且具有潛在的應用價值。為此,本實驗采用Transwell system建立大鼠MSCs與大鼠肌腱細胞體外共培養(yǎng)模型模擬肌腱細胞微環(huán)境,并采用生物化學、分子生物學技術(shù)考察肌腱細胞微環(huán)境對大鼠MSCs增殖和腱/韌帶相關(guān)基因表達的影響。主要研究工作和結(jié)果如下:
   1.大鼠MSCs和肌腱細胞的原代分離培養(yǎng)
   利用密度梯度離心結(jié)合差異貼壁法進行大鼠MSCs的原代分離

4、培養(yǎng),結(jié)果顯示:1.073 g/mL的percoll密度梯度離心結(jié)合差異貼壁分離得到的細胞為形態(tài)比較均一的單核細胞,用含10%胎牛血清(Fetal bovine serum,F(xiàn)BS)的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后細胞開始貼壁,繼而分裂增殖,呈集落式生長,約2周后接近融合,呈紡錘形或長梭形的成纖維細胞樣形態(tài)。其間有漂浮不貼壁的造血細胞等雜細胞,可在多次換液中被除去。待細胞融合后用0.25%胰酶/0.02%EDTA消化傳代。
  

5、通過組織塊爬片法進行肌腱細胞的原代分離培養(yǎng)。無菌分離大鼠前肢肌腱組織,剪成小塊,在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)大約一周,即可見細胞爬出,呈典型的長梭形,形態(tài)均一,細胞光滑,順膠原纖維的長軸成行排列,約兩周在組織塊周圍形成漩渦狀集落,細胞呈長梭形或菱形。
   2.大鼠MSCs的鑒定
   姬姆沙染色顯示培養(yǎng)細胞胞核呈圓形或橢圓形,為紫色,可見數(shù)個深紫色的核仁,胞漿為淡紫色。利用免疫染色方法考察細胞表面相關(guān)抗原的表達,利用流式細胞

6、技術(shù)分析了細胞周期的分布。結(jié)果發(fā)現(xiàn):細胞表面抗原CD34(造血干細胞標記物)呈陰性,CD44和CD29呈陽性表達。細胞周期分析顯示G0/G1期細胞占(89.74±3.87)%,S期細胞占(2.49±2.20)%,G2/M期細胞占(7.70±3.70)%,表明大部分細胞呈非增殖狀態(tài),符合干細胞的特征。
   3.肌腱細胞微環(huán)境對MSCs增殖的影響
   本文首先通過MTT法測定了大鼠MSCs的生長曲線,分析了MSCs與肌腱

7、細胞共培養(yǎng)1-7天后MSCs的增殖行為變化情況,其次通過RT-PCR技術(shù)檢測了MSCs在肌腱細胞共存微環(huán)境下c-fos基因表達的變化。結(jié)果顯示:第1-2天為MSCs生長潛伏期,第3-7天為對數(shù)增長期,7天以后細胞的生長進入平臺期。在共培養(yǎng)的前兩天,共培養(yǎng)組和對照組(MSCs單獨培養(yǎng))細胞的增殖行為沒有明顯差異。從第3天開始共培養(yǎng)組MSCs的增殖加快,與對照組相比有顯著性差異。細胞形態(tài)觀察也發(fā)現(xiàn)共培養(yǎng)組MSCs的生長情況好于對照組。RT-

8、PCR檢測結(jié)果顯示:與肌腱細胞共培養(yǎng)4天,共培養(yǎng)組c-fos基因的表達高于對照組,共培養(yǎng)7天c-fos基因表達顯著高于對照組。這些結(jié)果表明,肌腱細胞微環(huán)境對MSCs的增殖起促進作用。4.肌腱細胞微環(huán)境對MSCs腱/韌帶相關(guān)基因表達的影響
   本文將肌腱細胞與MSCs共培養(yǎng),觀察肌腱細胞微環(huán)境對MSCs分化的誘導。分別在共培養(yǎng)7、14、21天提取MSCs的總RNA,采用RT-PCR技術(shù)檢測腱/韌帶發(fā)育相關(guān)的四個關(guān)鍵基因Colla

9、genⅠ(ColⅠ)、CollagenⅢ(ColⅢ)、Tenascin(TNC)、Scleraxis(SCX)的表達變化。實驗結(jié)果顯示:共培養(yǎng)7天,腱/韌帶相關(guān)四個基因的表達均有一定程度的增加,但是與對照組相比并沒有顯著性差異;隨著培養(yǎng)時間的延長,分別共培養(yǎng)14和21天后,四個基因的表達量持續(xù)增加,與對照組相比均呈現(xiàn)出顯著性差異,并與大鼠肌腱細胞中四個相應基因的表達情況進行了比較。從細胞形態(tài)觀察,共培養(yǎng)21天后MSCs由紡錘型逐漸向規(guī)則

10、的棱形轉(zhuǎn)變,細胞均一性好,排列整齊,與分離培養(yǎng)的肌腱細胞形態(tài)更加相似。實驗結(jié)果表明:肌腱細胞微環(huán)境能促進MSCs上腱/韌帶相關(guān)基因的表達,提示MSCs在肌腱細胞微環(huán)境誘導下具有向肌腱細胞定向分化的趨勢。
   本文的研究結(jié)果表明,肌腱細胞微環(huán)境對大鼠MSCs的增殖和分化行為起著重要的調(diào)節(jié)作用。肌腱細胞微環(huán)境不僅可以促進MSCs增殖,而且可以促進MSCs上腱/韌帶相關(guān)基因的表達,誘導MSCs向腱/韌帶細胞方向分化。這些實驗結(jié)果為臨

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論