白芍總苷脂質(zhì)體誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡與分子機(jī)理的研究.pdf

1、目的：該研究為了驗(yàn)證白芍總苷脂質(zhì)體（TGP）對(duì)白血病的治療效果，并從細(xì)胞形態(tài)以及分子水平上明曉其藥用機(jī)理，并為后階段TGP在白血病治療中應(yīng)用規(guī)程的制定提供理論依據(jù)?？疾霻GP對(duì)于 K562、HL-60以及人骨髓白血病細(xì)胞的抑制效果，觀察K562、HL-60以及人骨髓白血病細(xì)胞的凋亡過程中形態(tài)學(xué)改變，考察HL60細(xì)胞在TGP誘導(dǎo)下相關(guān)凋亡基因與蛋白表達(dá)的變化規(guī)律，探究其細(xì)胞凋亡過程中的信息分子傳遞過程。
　　方法：該研究以K562、

2、HL60細(xì)胞系以及人骨髓白血病細(xì)胞為材料，并采用同時(shí)設(shè)置培養(yǎng)時(shí)間、TGP濃度兩個(gè)自變量進(jìn)行白血病抑制性細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，并以CCK8法檢測其細(xì)胞增殖抑制率表現(xiàn)。對(duì)TGP濃度、培養(yǎng)時(shí)間以及白血病細(xì)胞種類3個(gè)因素的抑制效應(yīng)進(jìn)行方差分析。使用200ug/ml白芍總脂質(zhì)體培養(yǎng)HL60，并對(duì)空白對(duì)照組與6h、12h處理組鏡檢觀察其形態(tài)學(xué)變化。分別使用RT-PCR與Western Blot方法，鑒定TGP對(duì)于內(nèi)源性細(xì)胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Cas

3、pase3和Caspase9的基因與蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：
　　（1）TGP對(duì)K562、HL60和人骨髓白血病細(xì)胞表現(xiàn)出隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，抑制率不斷的上升（R=0.797，P=0.000<0.05）；隨著TGP濃度的上升，抑制率亦不斷上升（R=0.196，P=0.013<0.05）。通過三因子方差分析表明，TGP濃度、白血病細(xì)胞種類、培養(yǎng)時(shí)間均對(duì)抑制率表現(xiàn)出極顯著效應(yīng),其中TGP濃度的F值表現(xiàn)最大，達(dá)到了162

4、9.132。
　?。?）在細(xì)胞形態(tài)學(xué)上觀察12h之后的細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn)，HL60細(xì)胞已經(jīng)明顯的表現(xiàn)出固縮、邊集、碎裂等典型的凋亡細(xì)胞核形態(tài)特征，細(xì)胞核的形態(tài)上不規(guī)則程度也在不斷的加大。使用流式細(xì)胞儀觀察其凋亡率，結(jié)果表明：K562細(xì)胞凋亡率由3.0％顯著上升至42.49%（X2=74.526，P=0.000<0.05）；HL60由3.87%顯著上升至46.73%（X2=71.331，P=0.000<0.05）；人骨髓白血病細(xì)胞由4.1

5、5%顯著上升至52.46%（X2=81.800，P=0.000<0.01），均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　?。?）在mRNA的表達(dá)水平上，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，Bcl-2的表達(dá)水平顯著下降（R=-0.880，P=0.000<0.05）、Bax則顯著上升（R=0.825，P=0.000<0.05）、Bcl-2/Bax比值顯著下降（R=-0.957，P=0.000<0.05）；Caspase3（R=0.676，P=0.008<0.05）和Cas

6、pase9（R=0.606，P=0.018<0.05）表現(xiàn)出明顯的上升趨勢。在蛋白質(zhì)的表達(dá)水平上，同樣表現(xiàn)出Bcl-2的表達(dá)水平不斷下降（R=-0.899，P=0.000<0.05）、Bax（R=0.695，P=0.005<0.05）、Caspase3（R=0.807，P=0.001<0.05）和Caspase9（R=0.597，P=0.020<0.05）則不斷上升；在Bcl-2/Bax比值之上，表現(xiàn)出不斷下降趨勢（R=-0.757，P